HPLC法测定复方五指柑胶囊中盐酸小檗碱的含量论文.docVIP

　　HPLC法测定复方五指柑胶囊中盐酸小檗碱的含量论文 .freelonsil ODS(250 mm×4.6 mm,5 μm)色谱柱,流动相为乙腈-0.033 mol/L磷酸二氢钾水溶液(30∶70),流速1.0 mL/min,检测波长347 nm,柱温30 ℃。结果 盐酸小檗碱在2.52～12.6 μg/mL范围与峰面积呈良好的线性关系,该制剂中的盐酸小檗碱平均含量为1.686 mg/粒。结论 本法简便、准确,可作为该制剂含量控制方法。 【关键词】 复方五指柑胶囊；高效液相色谱法；盐酸小檗碱；含量测定 Key ination 复方五指柑胶囊是在部颁标准收载品种复方五指柑片的基础上研制而成,.freelonsil(钻石)ODS(250 mm×4.6 mm,5 μm),流动相：乙腈-0.033 mol/L磷酸二氢钾水溶液(30∶70),流速1.0 mL/min,检测波长347 nm,柱温30 ℃。在此条件下盐酸小檗碱与其他组分能达到基线分离,盐酸小檗碱对照品保留时间为11.00 min左右,色谱图见图1。 2.2 对照品溶液的制备 精密称取经五氧化二磷真空干燥至恒重的盐酸小檗碱对照品适量,加乙醇制成每1 mL含盐酸小檗碱5 μg的溶液,即得。 2.3 供试品溶液的制备 取复方五指柑胶囊内容物,研细,取约1 g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入盐酸-甲醇(1∶100)50 mL,称定重量,充分振摇后,超声处理(功率100 in,放冷,称定重量,用盐酸-甲醇(1∶100)补足减失的重量,摇匀,滤过。照柱色谱法《中华人民共和国药典》2000年版(一部)附录ⅥC试验,精密量取滤液5 mL,加入氧化铝柱(内径约9 mm,中性氧化铝5 g,湿法上柱,用乙醇30 mL预洗)上,用30 mL乙醇分次洗脱,收集洗脱液,置50 mL量瓶中,加乙醇至刻度,摇匀,即得1-4。 2.4 空白试验 取处方量的药材(不含功劳木),依法制成阴性对照品溶液,按前法进行测定。结果未检出盐酸小檗碱峰,故可确定处方中其他药材成分对盐酸小檗碱的含量测定不产生干扰,见图1。 2.5 线性关系的考察 精密称取经五氧化二磷真空干燥至恒重的盐酸小檗碱对照品3.15 mg,置于100 mL量瓶中,加乙醇溶解并稀释至刻度,其浓度为31.5 μg/mL,作为对照品储备液。分别精密量取该储备液4、8、12、16、20 mL至50 mL量瓶中,加乙醇至刻度,浓度分别为2.52、5.04、7.56、10.08、12.6 μg/mL,作为对照品溶液。分别取对照品溶液10 μL注入色谱仪,以峰面积为纵坐标、浓度为横坐标进行回归,绘制标准曲线,得盐酸小檗碱的回归方程为：Y＝54 808.2X－10 273.6,r＝0.999 8,表明盐酸小檗碱在2.52～12.6 μg/mL范围有良好的线性关系。 2.6 精密度试验 取同一批号样品,依供试品溶液制备方法制备并测定,连续进样5次,每次10 μL,测定峰面积,结果分别为290 854、290 682、289 990、287 664、292 657,平均峰面积为290 369.4, RSD＝0.62%。表明本方法具有良好的精密度。 2.7 重复性试验 取5份同一批号样品,依供试品溶液制备方法制备并测定,每次10 μL,测定峰面积,含量分别为0.274%、0.265%、0.273%、0.271%、0.277%,平均含量为0.272%,RSD＝1.64%。表明本法重复性良好。 2.8 稳定性试验 取同一批号样品,按供试品溶液制备方法制备,分别在0、1、2、3、4、5、6、7、8 h进行测定,每次进样10 μL,比较峰面积,结果分别为287 882、294 712、293 151、288 945、295 062、294 328、301 690、293 207、292 426。平均峰面积为293 489.2,RSD＝1.27%。结果表明,样品制备后8 h内测定,结果均稳定,故应在8 h内完成测定。 2.9 回收率试验 采用加样回收法,取同一批号已知含量的复方五指柑胶囊内容物5份,按比例添加盐酸小檗碱对照品液,按上述色谱条件测定,计算回收率,结果见表1。结果表明,本方法具有良好的回收率。 表1 盐酸小檗碱回收率试验结果（略） 2.10 样品测定 取3批样品,按照供试品溶液制备方法制备,每份测定3次,取平均值,计算含量。结果3批平均值为1.686 mg/粒。见表2。表2 样品中盐酸小檗碱含量测定结果（略） 3 讨论 3.1 测定波长的选择 盐酸小檗碱对照品溶液在200～400 nm波长范围内进行光谱扫描,结果在265、347 nm波长处均有吸收,但用265 nm波长测定时有一定干扰,故采用347 n