HPLC法测定恒古骨伤愈片中橙皮苷的含量论文.docVIP

　　HPLC法测定恒古骨伤愈片中橙皮苷的含量论文 .freel-pack-C18色谱柱(150 mm×4.6 mm,5 μm),以乙腈-0.4%磷酸水(20∶80)为流动相,检测波长283 nm。结果 橙皮苷线性范围为0.194～0.970 μg,r＝0.999 9,橙皮苷的平均回收率为98.50%,RSD＝0.63%。结论 该方法用于测定恒古骨伤愈片中橙皮苷的含量,具有简便、准确、灵敏的特点,可作为该制剂质量控制的指标。 【关键词】 恒古骨伤愈片；橙皮苷；高效液相色谱法；含量测定 Abstract：Objective To determine the content of Hesperidin in Henggu Gushangyu Tablets by high performance liquid chromatography. Methods The determination -pack-C18 column (150 mm×4.6 mm, 5 μm) obile phase of acetonitrile-0.4% phosphoric acid . Results Good linear relationship of Hesperidin betount ethod is simple,.freelination 恒古骨伤愈片是由中成药恒古骨伤愈合剂(收载于《国家中成药标准汇编 骨伤科分册》)改变剂型而制成的新制剂1,药味由陈皮、红花、三七等9味中药组成,具有活血益气、补肝肾、接骨续筋、消肿止痛、促进骨折愈合的功效,用于新鲜骨折及陈旧骨折、股骨头坏死、骨关节病、腰椎间盘突出症等。为控制本品的质量,本试验采用高效液相色谱(HPLC)法测定了恒古骨伤愈片中橙皮苷的含量,作为其内在质量控制指标之一。 1 仪器与试药 日本岛津LC-10 AT高效液相色谱仪；SPD-10A紫外检测器；KQ-250型超声波处理器。 橙皮苷对照品购于中国药品生物制品检定所(批号1107221-200211,HPLC面积归一化法,测定含量为99.99%)；恒古骨伤愈片由吉林万德制药有限公司提供(批200804032008050220080504,20080506,2008057)。其他所用化学试剂均为国产AR级。 2 方法与结果 2.1 色谱条件 色谱柱：Shim-pack-C18(4.6 mm×150 mm,5 μm)；流动相为乙腈-0.4%磷酸水(20∶80)；流速：1 mL/min；紫外检测波长：283 nm；理论塔板数按大黄素计算不低于5 000；柱温为室温2。 2.2 对照品溶液的制备 精密称取橙皮苷对照品适量,加甲醇制成每1 mL约含0.05 mg的溶液,即对照品溶液。 2.3 供试品溶液的制备 取本品20片,研细,取约0.3 g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇25 mL,称定重量,超声提取(功率180 in,取出,放冷,再称定重量,加甲醇补足减失的重量,摇匀,用微孔滤膜(0.45 μm)滤过,即得。 2.4 阴性对照溶液的制备 按处方量制备不含陈皮药材的阴性样品,按供试品溶液的制备方法制备阴性对照溶液。分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各10 μL,注入液相色谱仪中,按上述色谱条件测定。结果表明,阴性对照溶液色谱图中与对照品相应位置处无干扰,此法可行(见图1)。 2.5 线性关系考察 精密称取橙皮苷对照品适量,加甲醇制成每1 mL含橙皮苷0.048 5 mg的对照品溶液。精密吸取对照品溶液4、8、12、16、20 μL注入高效液相色谱仪,记录色谱图,测定其峰面积。以峰面积值(A)对进样量(C)进行回归,得到回归方程为：Y＝1 008 770.377X＋25 623.859,r＝0.999 9,结果表明,橙皮苷在0.194～0.970 μg范围内进样量与峰面积呈良好的线性关系。 2.6 精密度试验 精密吸取供试品溶液连续5次重复进样,测得橙皮苷峰面积RSD＝0.57%。 2.7 稳定性试验 精密吸取供试品溶液在0、2、4、6 h分别进样,进行测定。结果橙皮苷峰面积RSD＝0.47%,表明在6 h内供试品溶液中橙皮苷含量稳定。 2.8 重复性试验 精密称取同一批号样品5份,按供试品溶液的制备方法制备,依法进样分析,结果样品中橙皮苷含量RSD＝0.50%,表明其重复性良好。 2.9 加样回收率试验 精密称取橙皮苷对照品适量,加入到已测知橙皮苷含量的恒古骨伤愈片样品(批橙皮苷含量3.081 5 mg/g)中,精密加入甲醇50 mL,称定重量,