STAT3基因在骨肉瘤组织中的表达及临床意义论文.docVIP

　　STAT3基因在骨肉瘤组织中的表达及临床意义论文 【摘要】 目的：探讨信号转导与转录激活因子3( signal transducerand activator of transcription 3,STAT3)基因在骨肉瘤组织中的表达及临床意义。方法 ：将武汉市四大三级甲医院收集的骨肉瘤20例及良性骨软骨瘤5例标本,应用免疫组织化学方法检测各组组织中STAT3基因的表达水平, 采用HPIAS1000图文报告管理系统对STAT3基因的表达进行定量分析，并用SPSS11.5软件对各组免疫组织化学反应阳性颗粒平均光密度、阳性面积率做单因素方差分析和SNK(q)检验。结果：STAT3基因在骨肉瘤组织中呈高表达, STAT3基因在良性骨软骨瘤组织中呈低表达, STAT3基因在骨肉瘤组织中的表达与良性骨软骨瘤组织的表达比较差异有显著性(P 0.05)。结论：STAT3基因在骨肉瘤的分子发病机制中可能起了重要的作用,并可作为判断骨肉瘤患者预后的参考指标之一。 【关键词】 骨肉瘤; STAT3癌基因; 免疫组织化学 骨肉瘤是最常见的骨原发恶性肿瘤。美国每年约诊断900例骨肉瘤，中国骨肉瘤发病率在原发恶性肿瘤中居首位，发病率为1.5～2.0/10万，多发于10～20岁的青少年的长骨,尤以股骨下段和胫骨上段多见1。骨肉瘤早期临床症状无特异性,且病情进展较快,大多数病例就诊时已经进入临床ⅡB期。这些患者中有相当一部分会出现肺转移,肺转移是其主要死亡原因,80%的病例在确诊时已有肺部微小转移灶2～4。 信号转导和转录活化因子(signal transducers and activators of transcription, STATs)家族是一种存在于胞浆并在激活后能够转入核内与DNA结合的蛋白家族,.freelpus公司)。 1.3 方法 1.3.1 蜡块切片厚5μm，贴片于涂有多聚赖氨酸的洁净载玻片上，置于烤箱烤干待用。 1.3.2 免疫组织化学SP法检测STAT3相关抗原 具体步骤： ① 4μm组织切片常规脱蜡至水后，0.01M PBS(pH 7.4)漂洗3×3 min; ② 抗原修复(柠檬酸缓冲液微波抗原修复法)，室温自然冷却后，0.01M PBS(pH 7.4)漂洗5×3 min; ③ 滴加3%过氧化氢，37℃湿盒孵育10min以抑制内源性过氧化物酶活性，0.01M PBS(pH 7.4)漂洗3×3 min; ④ 正常羊血清37℃湿盒孵育10min以减少非特异性背景; ⑤ 甩去多余血清，分别滴加一抗，4℃孵育过夜，0.01M PBS(pH 7.4)漂洗3×5 min; ⑥ 滴加生物素标记的二抗37℃湿盒孵育10min，0.01M PBS(pH 7.4)漂洗3×3 min; ⑦ 滴加链霉素抗生物素蛋白过氧化物复合物37℃湿盒孵育10min，0.01M PBS(pH 7.4)漂洗3×3 min; ⑧ 滴加新鲜配置的DAB显色液显色，光镜下控制反应时间(约3～5 min)，自来水冲洗终止反应; ⑨ 苏木素复染，流水冲洗，1%盐酸酒精分色数秒，流水冲洗，0.1%氨水返蓝; ⑩ 梯度酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片并镜检; 用PBS代替一抗作为阴性对照组，购买的阳性片作为阳性对照组。 1.3.3 免疫组织化学结果判断 STAT3阳性染色为棕黄色颗粒，定位于细胞核和胞质内。阴性对照组除细胞核染成蓝色外，应无棕黄色反应物。 采用HPIAS1000 高清晰度彩色病理图文报告管理系统(同济千屏影像公司)对STAT3基因的表达进行定量分析，每张切片随机选取5个完整而不重叠的高倍镜视野(×400) ,测定每个视野下阳性反应的平均光密度、阳性反应面积和所有细胞总面积,计算阳性面积率(阳性面积率=单位面积中阳性反应的总面积/单位面积中细胞的总面积×100%)。以每例5个视野的平均光密度、阳性面积率的平均值作为该例的测量值。 1.4 统计学处理 数据以均数±标准差表示，用SPSS11. 5 软件对各组免疫组织化学反应阳性颗粒的平均光密度、阳性面积率做单因素方差分析和SNK(q) 检验，检验水准α为0.05。 2 结果 在骨肉瘤组中可见密集分布的棕黄色颗粒，STAT3基因呈阳性表达;在良性骨软骨瘤组中可见少量的棕黄色颗粒，STAT3基因表达呈弱阳性或阴性。图像分析结果显示: 骨肉瘤组STAT3基因表达的平均光密度为0.2840±0.0107, 良性骨软骨瘤组STAT3基因表达的平均光密度为0.0954±0.0054; 骨肉瘤组STAT3基因表达的阳性面积率为0.3254±0.0497, 良性骨软骨瘤组STAT3基因表达的阳性面积率为0.1536±0.0127,经单因素分析骨肉瘤组与良性骨软骨瘤组比较(P 0