小麦愈伤组织继代过程中的同工酶谱研究.pdfVIP

摘要 国麦1号为材料，分别研究了不同长度幼穗对出愈率的差异及其在继代 过程中过氧化物酶和酸性磷酸酯酶酶谱的变化。结果表明： 1)在以幼穗为外植体进行愈伤组织诱导中，不同基因型幼穗的半愈 期之间有显著的差异，较短的半愈期形成的愈伤组织颗粒生长旺盛，增 殖的较快；较长半愈期的品种形成的愈伤组织颗粒生长较缓慢，产生的 愈伤组织大多呈现白色、透明、松软状。 最容易产生愈伤组织，增殖也快，接种后10天出愈率100％，有的颗粒直 径达3mm，接种20天多数愈伤组织块达5-6mm，生长旺盛，呈现米黄色。 过氧化物同工酶酶谱结果表明：0．5-1．5cm长的幼穗愈伤组织酶带比长度 小于0．5cm的幼穗愈伤组织酶带多出两条酶带并且酶带颜色较深。 3)cu2+对愈伤组织的继代培养有着重要的影响。0．1mmol／L Cu2+对愈 伤组织具有较好的筛选作用，能使较好的愈伤组织生长迅速，颗粒明显 增加。不同基因型愈伤组织对cu2+的忍耐程度表现出明显的差异，其中豫 麦18、豫麦49对cu”的忍耐程度较高，保存下来的愈伤组织较多。过氧 化物酶同工酶的酶谱表明：0．1mmol／LCu2+筛选出的愈伤组织比 4)不同愈伤组织继代过程中过氧化物酶的酶谱表现出明显的差异， 与幼胚相比第一代中幼穗来源的愈伤组织过氧化物酶带颜色较深，且多 出了几条酶带。第四代中过氧化物酶带颜色较浅，酶带少几条酶带。不 同继代次数过氧化物酶酶谱随继代次数的增加酶带减少。 5)酸性磷酸酯酶酶谱的变化与过氧化物酶相似。不同继代次数酸性 磷酸酯酶表现出差异，在第六代、第七代酶谱中酶带数最少。 关键词 小麦愈伤组织 继代 过氧化物同工酶 酸性磷酸酯同工酶 1文献综述 小麦作为世界上栽培面积最大，产量最高，加工制品最为丰富的粮 食作物，在我国也是仅次于水稻的第二大粮食作物。因此，小麦主产状 况直接关系到国计民生和社会稳定。随着人们生活水平的提高，常规杂 交育种不能满足人民对品种的品质要求，并且育成的品种往往因为l～2 个明显缺点而逐步或迅速在生产上失去利用价值。这就迫使人们去寻找 新的品种改良的方法。六十年代以来，植物组织与细胞培养技木的迅速 发展，己能使近千种植物的组织、细胞或原生质体，经过离体培养再生 完整植株。这就使得植物组织培养技术成为改良当前推广品种某些不良 特性的一条有效途径。禾谷类作物植株再生的主要途径是体细胞胚胎发 生，高效诱导胚性愈伤组织在禾谷类作物组织培养中具有特别重要的意 义。1。但是小麦体细胞再生成为植株却很困难，随着继代次数的增加，愈 伤组织的胚性丧失，愈伤组织的再生能力下降，因此如何提高愈伤组织 的诱导能力、保持愈伤组织的胚性、提高其分化再生能力已成为小麦组 织培养技术发展的瓶颈问题。 在小麦的各种外植体中，幼穗、幼胚是再生植株的较好的外植体b。3。 由它们诱导产生的愈伤组织无性系，具有多方面重要的应用价值。但是， 这一体系的建立受到诸多因索的影响，外源植物激素的种类和浓度b’6。83， 供体基因型口’6…、碳源的种类和浓度、幼穗的发育状态、幼胚的发育成熟 程度以及不同的诱导培养基都对小麦愈伤组织的诱导频率有着深远的影 响，而且在继代过程中愈伤组织也会发生方方面面的变化。因此，通过 研究不同因素对小麦愈伤组织诱导、继代的影响，解析胚性愈伤组织和 非胚性愈伤组织之间的差异和转变规律，比较愈伤组织在继代过程中发 生的各种变化，从而为寻求不依赖于基因型的小麦愈伤组织的高频诱导 和长期稳定继代的条件，搞清小麦愈伤组织在诱导、继代过程中所发生 的各种变化以及胚性愈伤组织和非胚性愈伤组织之间产生的种种差异的 发生机制等问题，对于如何保持愈伤组织继代过程中的胚性，建立小麦 愈伤组织继代过程中的生化标记具有重要的理论和实践意义。 1．1小麦组织培养的意义 小麦的组织培养工作开始于70年代“”1。近三十多年来，人们已成 功地从各种外植体中经过离体培养获得了完整的再生植株。其中，幼穗、 幼胚是组织培养中常用的和较好的外植体材料。’”…，由它们获得的愈伤 组织，具生活力旺盛，易于再生等特点H1。 同时，小麦幼胚在离体培养条件下，经诱导脱分化形成的愈伤组织 中有胚性愈伤组织和非胚性愈伤组织之分。胚性愈伤组织具有再