杜氏藻分子系统学分析、pds基因的克隆与分析及初步应用RNAi的基因功能研究.pdf

Southem 录号为DQ845248。对序列信息进行了详细的分析， bloRing结果显示 pds基因在杜氏盐藻基因组中存在一个拷贝，应用半定量RT-PCR的方法对该基 因在藻生长过程的各个阶段的表达情况进行了分析。 探讨了电激转化盐生杜氏藻的条件，并实现了质粒pBl211∞m的瞬时表达。 kV／cm和低电压高电容模式下 采用了两种电激模式．高电压低电容模式下3-7 300—500V／cm，对盐生杜氏藻细胞转化质粒后，从多个方面动态检测了转化效果。 实验组细胞数量与对照组于第四天起有差异，实验组活细胞数量多于对照组 (p0．05)，未加质粒的对照组第16天细胞存活很少，20天后完全死亡，加质粒 的实验组死亡速度明显慢于对照组(pO．05)；转化后16天内实验组细胞PCR 扩增检测cat基因部分序列结果呈阳性：组织化学染色法检测GUS基因表达， 有蓝色反应；由此推断，质粒pBl221．cat在盐生杜氏藻中表达，因此具有氯霉 素抗性并表达B一葡糖苷酸酶。 转化实验组盐生杜氏藻细胞24天后最终全部死 亡，说明表达为瞬时，PCR和GUS组织染色也证明质粒的存在和表达为瞬时。 为下一步在盐生杜氏藻中实现以RNAi的方法研究基因功能提供实验基础。 在前面工作基础之上，pBl221．eat为基础，插入正反向重复序列，构建表达 pBIRNAI—Dsa构建成功。构建成功载体以电激的方法转入盐藻细胞，以非双链表 达，以2-触6法来处理数据，表示目的基因的表达相对改变量。数据显示，较 的pds基因表达显著下降，说明pds基因的表达受到抑制。在杜氏盐藻中建立以 RNAi研究基因功能的方法，为有效研究其耐盐机制提供快速有效工具。 关键词：杜氏盐藻； RF--RA眠八氢番茄红素脱氢酶；电激；R№ 干扰 V111 Molecular of phylogenyanalysisDunaliella,pdsgene and functionresearchRNAi method cloninggene by Abstract its in Dunaliella for of salina,weU-knownabilitygrowing hi曲salinity environmentandthe toaccumulateamountsofcarotenoidsundervarious ability large stress itfin model tO themolecular conditions，makeimportantorganisminvestigate mechanismoftheearotenoids andaccumulationandthemolecular biosynthesis ofits wide ofsalinifies． mechanism to resistibilityrange In this of10strainsofDunaliellawe】lestudiedthe paper,geneticrelationships by innovativemethodofcombinationo