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天然药物化学实验人民卫生出版社 实验二 芦丁的提取与定性反应 概 述 黄酮类化合物广泛存在于自然界，是一类重要的天然有机化合物。其不同的颜色为天然色素家族添加了更多色彩。这类含有氧杂环的化合物多存在于高等植物及羊齿类植物中。 黄酮类化合物在花、叶、果等组织中多以苷的形式存在，而在木部坚硬组织中，多以游离苷元形式存在。 黄酮苷类虽有一定极性，可溶于水，但却难溶于酸性水，易溶于碱性水，故可用碱性水提取，再将碱水提取液调成酸性，黄酮苷类即可沉淀析出。此法简便易行，芦丁、橙皮苷、黄芩苷提取都应用此法。 一 实验目的和要求 实验目的： 通过芦丁的提取与精制掌握碱-酸法提取黄酮类化合物的原理及操作 通过芦丁结构的检识，了解苷类结构研究的一般程序和方法 了解UV及NMR在黄酮类化合物结构鉴定中的应用 实验要求 获得三个化合物：芦丁、槲皮素、芦丁的全乙酰物 能根据化学实验及UV、NMR数据初步推断出芦丁的结构。并对黄酮类化合物的结构测定有一般性的了解 实验流程 芦丁粉碎不可过细，以免过滤时速度过慢 加入石灰乳即可达到碱溶解提取芦丁的目的，还可以除去槐花米中含有的大量多糖类粘液质，但pH值不能过高，否则钙能与芦丁形成螯合物而沉淀析出 pH值过低会使芦丁形成氧盐重新溶解，降低收率（最佳pH值为5） * * 芦丁的提取与定性反应 芦丁的提取与定性反应 槲皮素 芦丁 芦丁十乙酰化物 芦丁的提取与定性反应 搅拌下加入石灰乳 加水300ml 槐花米（15g） 调节PH8-9 直火加热 保持微沸30min 双层滤纸趁热抽滤 滤液 残渣 在60-70度下，用浓盐酸调PH3-4 静置 提取 芦丁的提取与定性反应 定性反应 盐酸-镁粉反应 将样品溶于1ml乙醇，加入少许镁粉振摇，滴加几滴浓盐酸，1-2min内，观察颜色变化。 Molish反应 将样品溶于1ml乙醇，加入等体积10%α-萘酚溶液，倾斜试管，摇匀，沿管壁滴加浓硫酸，注意观察两界面产生的变化。 黄酮母核 苷类 芦丁的提取与定性反应 黄酮苷的水解 第一次实验所得滤液 滤液 沉淀（粗品芦丁） 均分2份 重结晶 水解 抽滤 按1：60量加入蒸馏水，沉淀悬浮于蒸馏水中，加热煮沸15分钟后，趁热抽滤 残渣 滤液 冷却，静置 精制芦丁（备用） 按1：70量加入2%硫酸，加热40min，放冷静置，抽滤 沉淀 滤液 干燥 槲皮素（备用） 糖鉴定 芦丁的提取与定性反应 糖的鉴定 水解所得滤液 用Ba(OH)2乳调PH值至中性，折叠滤纸过滤 1.5g Ba(OH)2加10ml水 残渣 滤液 蒸干，放冷 加1ml95%乙醇溶解 样品溶液 纸色谱 芦丁的提取与定性反应 糖的纸色谱鉴定 标准品：葡萄糖、鼠李糖 展开剂：BAW（4：1：5） 显色剂：邻苯二甲酸苯胺 点样 层析 芦丁的提取与定性反应 芦丁的全乙酰化 芦丁 0.1g 加入2ml无水吡啶 加入8ml醋酐 反应液 直火，水浴上回流30min，放冷，搅拌下将反应液倒入70ml水中，一直搅拌到油滴消失，白色沉淀析出为止 反应液 抽滤，干燥 反应物 防 水 芦丁的提取与定性反应 聚酰胺薄层色谱 样品：分别取少量芦丁、槲皮素、芦丁的十乙酰 化物用1ml95%乙醇溶解 展开剂：75%乙醇 10ml 显色剂：氨水，2%AlCl3 /EtOH 芦丁酰化物 槲皮素 芦丁 样品 槲皮素 芦丁 标准品 UV 日光 UV 日光 UV 日光 Rf值 AlCl3 喷雾 氨水熏 颜色 观察记录 芦丁的提取与定性反应 定性反应 盐酸-镁粉反应 将样品溶于1ml乙醇，加入少许镁粉振摇，滴加几滴浓盐酸，1-2min内，观察颜色变化。 Molish反应 将样品溶于1ml乙醇，加入等体积10%α-萘酚溶液，倾斜试管，摇匀，沿管壁滴加浓硫酸，注意观察两界面产生的变化。 黄酮母核 苷类 样品：少量芦丁、槲皮素 芦丁的提取与定性反应 2%二氯氧锆-柠檬酸反应 将样品溶于1ml乙醇，加入2%二氯氧锆-柠檬酸溶液，摇匀，观察颜色变化。将反应液均分成两份，向其中一份滴加柠檬酸甲醇溶液，另一部分加等量醇溶液作对照。比较颜色变化。 3-OH，5-OH 定性反应 稳定性： 3-OH络合物〉5-OH络合物 芦丁的提取与定性反应 实验注意事项 芦丁的提取与定性反应 *