蟾酥软膏对类风湿性关节炎抗炎镇痛作用及机理研究.pdfVIP

体重，观察并记录30min内小鼠出现的扭体次数，比较各组差异。 2．2蟾酥软膏的抗炎作用研究 2．2．1蟾酥软膏对蛋清所致大鼠足肿胀的影响 SPF级体重180～2209SD大鼠，雌雄各半，随机分为空白对照组、阳性对 照组、3％、6％和12％蟾酥软膏组。先用足趾容积测量仪测量大鼠后肢足趾容 积，然后分别足趾部外涂该组药物19，只，天，连续7天，末次涂药后lh每鼠右 后足跖皮下注射新鲜蛋清0．2ml，分别于1、2、3、4h测量大鼠后肢足趾容积各 一次，计算足趾肿胀程度，比较各组差异。 2．2．2蟾酥软膏对小鼠腹腔毛细血管通透性的影响 SPF级体重18～229NIH小鼠，雌雄各半，随机分为空白对照组、阳性对照 组、3％、6％和12％蟾酥软膏组，腹部剃毛分别外涂该组药物0．19／只／天，连续 7天，末次涂药后1h每只小鼠均尾静脉注射O．5％伊文思蓝0．01ml／g体重，随即 生理盐水洗涤数次，收集洗液并调整终体积至8ml，离心，取上清液于分光光度 计590rim测吸光度，比较各组差异。 2．2．3蟾酥软膏对大鼠棉球肉芽肿的影响 ． SD大鼠，雌雄各半，随机分为空白对照组、阳性对 SPF级体重180～2209 照组、3％、6％和12％蟾酥软膏组。大鼠乙醚浅麻醉，腹部用碘酒消毒，75％ 酒精棉球脱碘，切lena长小口，取两个20±lmg高压灭菌棉球分别植入大鼠两 侧腋窝皮下，随即缝合皮肤。手术当日始分别外涂该组药物0．1e,／只／天，连续7 天，末次给药后脱颈椎处死，取出棉球，剔除脂肪组织，放烘箱60(2烘干，称 重，减去原棉球重量即得肉芽肿净重。 2．2．4蟾酥软膏对佐剂性关节炎大鼠模型的影响 SD大鼠，雌雄各半，随机分为空白对照组、模型组、 SPF级体重180～2209 阳性对照组、3*／0、6％和12％蟾酥软膏组。模型组、阳性对照组、3％、6％和 12％蟾酥软膏组每鼠右后足跖皮下注射弗氏完全佐剂O．1ml，空白对照组大鼠右 后足跖皮下注射生理盐水O．1ml，然后分别外涂该组药物le,／只／天，连续7天。 观察指标： a．足趾肿胀程度的测量：造模前先用足趾容积测量仪测量大鼠后肢足趾容积，此 后隔周测量大鼠右后肢足趾容积各一次，计算足趾肿胀程度，比较各组差异。 皮毛、肌肉，取足跖关节剥除趾骨后将组织匀浆，测定大鼠足跖组织液IL·lp、 TNF．a、PGE2的含量。 e．血清SOD活力的检测：末次涂药后lh，每只动物从心脏抽血lml离心取血清 按SOD测试盒方法检测大鼠血清SOD活力。 d．血沉的测定；末次涂药后lh，每只动物从心脏抽血1．6ml加入0Aml枸橼酸钠 抗凝剂，吸入血沉管至“0”刻度处，将血沉管直立在血沉架上记时，在室温22 ℃下静置1h，观察记录红细胞下沉姗数。 e．足跖关节病理观察：末次涂药后lh将大鼠放清体血，剥离足趾关节皮毛、肌 肉、肌腱组织并暴露关节，取足趾关节剥除滑膜后以中性福尔马林固定。EDTA 液脱钙2周后石蜡包埋，切片HE染色检测，观察软骨缺损范围深度、纤维组织 增生、软骨炎细胞浸润等。 2．3皮肤毒理学实验研究 2．3．1皮肤急性毒性试验研究 普通级新西兰兔，雌雄各半，体重Z0kg左右，随机分成对照组(卡波姆基 质)和试验组(21．6％蟾酥软膏，为最大可溶浓度)：完整皮肤组和破损皮肤组。 取每种受试药物39分别均匀涂于脱毛区，并用无刺激性纱布及绷带加以固定。 给予受试药物24小时，去除受试物后l，24，48，72小时至第七日，每日观察 并记录动物的体重、皮肤毛发、眼和粘膜的变化、呼吸、中枢神经系统、四肢活 动等及其他中毒表现。 2．3．2皮肤刺激性试验研究 动物：普通级新西兰兔，雌雄各半，体重2．0kg左右。 a．完整皮肤的局部刺激性试验：试验采用同体左右侧自身对比，左侧去毛区涂受 试药21．6％蟾酥软膏19，右侧去毛区涂卡波姆基质19，并用无刺激性纱布及绷 带加以固定。其中单次给药刺激性试验在涂药24h后，用温水洗去残留药物，去 除受试药物后lh，24h，48h，72h肉眼观察皮肤反应；多次给药刺激性试验连 续给药7天，再停药7天。除观察、记录每日的红斑及水肿情况还应观察涂药部 位是否有色素沉着、出血点、皮肤租糙或者皮肤菲薄等情况。 b．破损皮肤的局部刺激性试验：试验前24h，用脱毛剂将兔背部脊柱两侧脱毛后 再用细砂纸摩擦造成局部擦伤，以