调肝治法方药抗心理应激损伤的部分神经免疫学机制研究.pdf

广州中医药大学2007届中医基础理论专业博士擘位论文 本研究团队以往一系列研究亦表明；中医肝主疏泄调畅情志的功能在实现对下丘’ 脑一垂体一肾上腺皮质系统的整体性调节上，还可能存在着一定的具体的中枢神经机 制：在作用机理上体现出局部(中枢神经机制)与整体(NIM网络)的有机统一．并且以 加味四逆散(JWSNS)为调肝治法方药之代表方，采用“方一证一效一脏腑功能本质”的研 究思路，对慢性应激损伤及调肝方药的作用机制进行了一系列的研究，探讨肝主疏泄 调畅情志功能的中枢神经生物学机制，其具体机制有待一步探讨。 心理应激动物模型的建立是开展心理应激机制研究的基础，但某些重要环节的偏 差与设计仍影响着中医药抗心理应激损伤机理的阐明。例如，心理应激模型中常用的 应激源包括束缚和制动、条件反射性电击足等或多或少均含有一定的躯体性应激成 份，某种程度上影响着单纯心理应激作用机制的阐明。Willner等受CUS模型启发于 1987年提出了“慢性轻度不可预知的应激模型”主要是将动物长时间的暴露在多种不 可预知的应激源下，这些应激源包括不定期的禁水、禁食、震动、电击、游泳等，由 此引起动物对奖励刺激的缺乏，是抑郁的重要表现“”，更真实的模拟了人们在现实生 活中遭遇的“困难”，可以认为此应激模型是一种有效的抑郁性应激模型。 鉴于HPA轴及其海马中枢调控在NIM网络调节机制中的重要作用，有必要迸一步 探讨与阐明HPA轴及其海马中枢调控作用在肝主疏泄调畅情志功能的具体机制。在动 物模型不断改进的基础上，不断接近肝主疏泄调畅情志的HP^调控作用机制的实质。 在上述理论基础支持下，本论文旨在迸一步研究不同性别、年龄情况下慢性心理应激 反应损伤的HPA轴等神经内分泌免疫学作用机制，以及中药复方对其的干预作用，为 最终从整体上阐明心理应激作用机制及中医调肝治法方药抗心理应激损伤的作用机 理奠定基础。 二、研究目标与内容 研究目标：开展调肝方药——加味四逆散(JWSNS)抗心理应激损伤HPA轴作 用方式及其神经内分泌免疫变化的实验研究，尝试阐明调肝治法抗不良心理应激损伤 的神经内分泌作用机制，探求安全有效的中医药抗心理应激方法。进而，从细胞及分 子水平进～步探讨调肝方药一加味四逆散OWSNS)在心理应激损伤状态下多层次、多 靶点调控NIM网络的作用机制，更加深入揭示加味四逆散抗心理应激损伤的神经免 疫学的物质基础及其作用方式。 研究内容：建立慢性轻度不可预计应激损伤大鼠模型，检测各试验组分中免疫功 能的变化，及其神经内分泌调控过程中外周与中枢各类激素等主要生化指标与病理改 变，观察调肝方药／WSNS的调控作用，以HPA轴为重点，探讨其作用可能的机制与 途径，研讨调畅情志疏肝之法在抗心理应激损伤中的作用机理。 干地黄189、石决明309。药材由本校第一附属医院药房提供，经药剂科鉴定均为纯正 II 调肝冶法方药抗慢性心理应澎损伤的部分神经免疫擘机制研究·摘要 药材。制备后置4℃冰箱内保存各用。各治疗组分别于应激造模前lh给予加味四逆散 · 2lIlI灌胃。 动物模型制作与分组：经慢性轻度不可预计应激动物模型改制而成，去除以往采 用模型中电击应激源的设置，减轻应激源的造模作用强度，以减少躯体因素的因素。 接受应激处理的组别大鼠单独放在一间独立的房间，在21天接受不同应激源的刺激， 应激源包括有限制空间Ih，45度斜笼7ll、湿笼1 7ll(湿笼是2009铺料倒100rnl水， 使垫料湿透)、新入侵者(两笼并笼)23h、持续光照36h、空瓶lh、禁食禁水23h。 (一)慢性轻度不可预计应激损伤大鼠模型的建立 本实验目的在于建立慢性轻度不可预计应激模型，观察不同年龄、性别大鼠模型 的特征。用表面效度、结构效度和预测效度三个效度对其进行综合评价。大鼠基本状 况观察结果表明，随着造模工作的进行，模型组大鼠整体状况不断明显下降，焦虑， 烦躁不安，排便增多，部分过程拒绝，呼吸急促，毛色发黯，发黄，存在修饰行为， 但不断减少，直到基本消失。治疗组整体状态强于模型组，但略弱于正常组，表现为 较安静，毛色虽杂乱，但略有光泽，修饰行为减少，抵抗行为减少，表明经中药复方 JWSNs组于预，基本状况有好转，但在应激源未解除之前，仍较疲倦。糖水消耗偏爱 度是判断