AHR小干扰RNA对肝癌HCCLM3细胞体外增殖与体内肿瘤生.PDFVIP

肿瘤2014 年3 月第34 卷第3 期　TUM OR Vol. 34, March 2014　　 223 DOI: 10.3781/j .issn.1000-7431.2014.03.005 Copyright© 2014 by TUM OR Basic Research 基础研究 · AHR小干扰RNA对肝癌HCCLM3细胞体外增殖和体内肿瘤生长的影响 陈艳美，姜　燕 复旦大学生物医学研究院系统生物学实验室，上海　200032 [摘要]　目的：探讨 RNA 干扰 （RNA interference ，RNAi ）芳香烃受体 （aryl hydrocarbon receptor ，AHR ）基因 表达对肝癌 HCCLM3 细胞增殖和迁移的影响及其可能的作用机制。方法：将AHR 基因特异性小干扰 RNA （small interference RNA ，siRNA ）转染人肝癌HCCLM3 细胞后，应用实时荧光定量 -PCR 法检测AHR mRNA 的表达水平， 蛋白质印迹法检测 AHR 和应激激活的蛋白激酶 （stress-activated protein kinase ，SAPK ）/c-J un N- 末端激酶 （c-J un N-terminal kinase ，J NK ）、细胞外信号调节激酶 1/2 （extracellular signal-regulated kinase 1/2 ，ERK 1/2 ）和 c-J un 蛋白及其磷酸化水平，CCK-8 （cell counting kit-8 ）法和 Transwell 法检测 AHR-siRNA 转染后对 HCCLM3 细胞 增殖和迁移能力的影响。合成AHR 基因特异性小发夹 RNA （small hairpin RNA ，shRNA ），构建稳定干扰AHR 基因表达的重组病毒载体 pMKO.1/puro-shAHR，并将其感染 HCCLM3 细胞，感染后的细胞接种于裸 鼠皮下建 立移植瘤模型，观察移植瘤的生长情况；蛋白质印迹法检测 pMKO.1/puro-shAHR 感染后 HCCLM3 细胞及裸 鼠 皮下移植瘤组织中AHR 蛋 白的表达水平。结果：AHR-siRNA 转染组 HCCLM3 细胞中AHR mRNA 和蛋 白的 表达水平明显下降 （ P ＜ 0 .0 1 ），细胞的增殖和迁移能力受到抑制 （P ＜ 0 .0 1 ）；SAP K/J NK 、ERK 1/2 和 c-J un 的磷酸化水平降低 （P ＜ 0 .0 1 ）。pMKO.1/puro-shAHR 感染后的 HCCLM3 细胞裸鼠皮下移植瘤体积和质量明显 低于对照组 （pMKO.1/puro-shNC 感染 HCCLM3 细胞）（P ＜ 0.01 ），pMKO.1/puro-shAHR 感染后的 HCCLM3 细胞及裸 鼠皮下移植瘤组织中AHR 蛋 白的表达水平降低 （ P ＜ 0.01 ）。结论：AHR 可能通过上调 SAPK/J NK、 ERK 1/2 和 c-J un 的磷酸化水平而促进 HCCLM3 细胞的体外增殖和迁移。 [关键词]　肝肿瘤；细胞增殖；细胞迁移分析；丝裂原活化蛋白激酶；基因，AHR ；细胞，HCCLM3 [中图分类号]　R735.7 [文献标志码] A [文章编号]　1000-7431 (2014) 03-0223-08 The effect of AHR small interference on hepatoma HCCLM3 cell proliferation in vitro and tumor growth in vivo CHEN Yan-mei, JIANG Yan Laboratory of Systems Biology, Institutes of Biomedical Scien