甜樱桃DELLA蛋白基因PaGAI的克隆与表达分析.pdfVIP

园 艺 学 报 2012 ，39 （1）：143 –150 http: // www. ahs. ac. cn Acta Horticulturae Sinica E-mail: yuanyixuebao@126.com 甜樱桃 DELLA 蛋白基因 PaGAI 的克隆与表达 分析 1 1 1 1 2 1,* 钟 翡 ，沈欣杰 ，刘 芳 ，袁华招 ，刘兰英 ，李天红 1 2 （中国农业大学农学与生物技术学院，北京市果树逆境生理与分子生物学重点开放实验室，北京 100193 ； 北京市 海淀区植物组织培养技术实验室，北京 100091 ） 摘 要：利用 RT-PCR 和 RACE 技术从甜樱桃（Prunus avium L. ）嫩叶中克隆了赤霉素信号转导途径 中的关键负调控因子DELLA 蛋白基因 cDNA 全序列，将其命名为 PaGAI 。该基因cDNA 全长 2 310 bp ， 开放阅读框 ORF 为 1 788 bp，推测其编码一个含有 595 个氨基酸残基的多肽链，蛋白质分子量约 64 kD 。 生物信息学分析结果表明，PaGAI 编码蛋白具有 DELLA 蛋白保守结构域，其 N 端存在两个非常保守的 酸性结构域 DELLA 和 VHYNP 作为信号感知区域，C 端有 VHIID 、RVER 和 SAW 结构域作为阻遏区域。 PaGAI 与其它植物的 DELLA 蛋白具有较高的同源性，其中与苹果 MdRGL2b 蛋白同源性最高，达到 84%。 构建 pGEX-4T-1/PaGAI 原核表达体系，并转化 E. coli BL21 ，经 0.5 mmol · L-1 IPTG 诱导蛋白表达， SDS检测获得了分子质量为 91 kD 的融合蛋白，半定量RT-PCR 分析表明，PaGAI 在花、果实、叶 片、韧皮部中普遍表达，在花与韧皮部中的表达远远强于在果实与叶片中的表达。 关键词：甜樱桃；DELLA 蛋白；基因克隆；原核表达 中图分类号：S 662.5 文献标识码：A 文章编号：0513-353X （2012 ）01-0143-08 Cloning and Expression Analysis of PaGAI gene of DELLA Protein from Prunus avium 1 1 1 1 2 1,* ZHONG Fei ，SHEN Xin-jie ，LIU Fang ，YUAN Hua-zhao ，LIU Lan-ying ，and LI Tian-hong 1 （College of Agronomy and Biotechnology，Key Laboratory of Stress Physiology and Molecular Biology for Fruit Trees of 2 Beijing ，China Agricultural University，Beijing 100193，China；Laboratory of Plant Tissue Culture Technology ，Haidian District ，Beijing 100091，China） Abstract ：DELLA protein is a key ne