温州蜜柑萎缩病毒小外壳蛋白基因克隆与原核表达及其抗体制备.pdfVIP

园 艺 学 报 2012 ，39 （1）：64 –72 http: // www. ahs. ac. cn Acta Horticulturae Sinica E-mail: yuanyixuebao@126.com 温州蜜柑萎缩病毒小外壳蛋白基因克隆与原核 表达及其抗体制备 1 1 1,2,* 1 武改霞 ，李婷婷 ，孙现超 ，青 玲 1 2 （西南大学植物保护学院，植物病害生物学重庆市高校级重点实验室，重庆 400716 ； 国家柑桔工程技术研究中心， 中国农业科学院柑桔研究所，重庆 400712 ） 摘 要：用 RT-PCR 方法，从采自重庆奉节的‘宫本’柑橘的 2 个样品中扩增出温州蜜柑萎缩病毒 （Satsuma dwarf virus ，SDV ）SDV RNA2 的 3′末端，长度为 975 bp，与报道的 SDV S-58 3′末端序列同源 性分别为 98.7%和 98.4% 。根据获得的序列设计引物，以含有 SDV FJ 3′末端序列的质粒为模板，PCR 扩 增获得大小为 654 bp 的 SDV-FJ 小外壳蛋白（Small coat protein，CPS ）基因产物。构建了CPS 与 GST -1 IPTG 条件下诱导表达，SDS电泳分析表明成 融合表达载体 PGEX-CPS ，在 37 ℃、1.0 mmol · L 功表达出分子量约为 42 kD 的 GST-CP 融合蛋白。以表达的融合蛋白为抗原免疫家兔，制备的抗血清的效 价为 1/12 800。用获得的抗体进行组织印迹分析表明，SDV 在柑橘叶柄基部韧皮部维管束区域含量最高。 关键词：柑橘；温州蜜柑萎缩病毒；小外壳蛋白；原核表达；抗体 中图分类号：S 666；S 436.629 文献标识码：A 文章编号：0513-353X （2012 ）01-0064-09 Cloning of the Small Coat Protein Gene ，Prokaryotic Expression and Antiserum Preparation of Satsuma dwarf virus 1 1 1,2,* 1 WU Gai-xia ，LI Ting-ting ，SUN Xian-chao ，and QING Ling 1 （Chongqing Key Laboratory of Plant Disease Biology，College of Plant Protection，Southwest University ，Chongqing 2 400716 ，China； National Center of Citrus Engineering and Technology Research ，Citrus Research Institute，Chinese Academy of Agricultural Sciences ，Chongqing 400712 ，China ） Abstract ：The 3′ terminal of SDV （Satsuma dwarf virus ）RNA2 was amplified from two plants of Miyamoto Satsuma mandarin from Fengjie in Chongqing by RT-