番茄无选择标记转化体系的研究.pdfVIP

中国蔬菜　2013（8）：19-25 CHINA VEGETABLES 番茄无选择标记转化体系的研究 邹芳玲　国艳梅　杜永臣　祝光涛　高建昌　胡　鸿 * （中国农业科学院蔬菜花卉研究所，北京 100081） 摘　要： 以含多毛番茄 GGPS 基因的表达载体 pBI121- GGPS 和无标记载体 pBINMF-GUS 为基础，利 用 载 体 pBINMF-GUS 的 T-DNA 区 无 选 择 标 记 基 因 的 特 点， 将 目 的 基 因 GGPS 连 接 于 pBINMF-GUS 的 T-DNA 中，用农杆菌菌株 EHA105、C58 介导转化番茄品种中蔬 6 号，利用 PCR 直接筛选转化体。结果表 明：MS+1.0 mg·L-1 ZT+0.5 mg·L-1 IAA 为子叶最佳芽诱导培养基，农杆菌菌株 EHA105 更利于中蔬 6 号的转化，获得阳性植株 4 株，转化率为 3.6%。PCR 及 RT-PCR 检测结果表明：目的基因已整合到中蔬 6 号基因组中，且在转录水平上得到表达。 关键词：番茄；根癌农杆菌；无选择标记；遗传转化 中图分类号：S641.2　　文献标识码：A　　 文章编号： 1000-6346（2013）08-0019-07 Studies on Tomato Marker-free Transformation System * ZOU Fang-ling，GUO Yan-mei，DU Yong-chen，ZHU Guang-tao，GAO Jian-chang，HU Hong Institute of Vegetables and Flowers Chinese Academy of Agricultural Sciences Beijing 100081 China ） （ ， ， ， Abstract ：In this paper，the aimed gene GGPS was cut from the binary plant expression vector pBI121- GGPS and ligated to the marker-free vector pBINMF-GUS，so a new marker-free vector was formed，in which T-DNA segment only harboured GGPS gene and a GUS gene. This vector was successfully transferred into tomato（Lycopersicum esculentum Mill. ） cultivar ‘Zhongshu No. 6’ via Agrobacterium-mediated transformation used strains EHA105 and C58. The results showed that MS+1.0 mg·L-1 ZT+0.5 mg·L-1 IAA was the best shooting medium for ‘Zhongshu No. 6’. The transformation rate of strain EHA105 was 3.6%，which was better than the rate of strain C58. The results of PCR analysis indicated that GGPS gene was integrated into the genome of‘Zhongshu No. 6’. RT-PCR detection indicated that GGPS gene was expressed at RNA level. Key words ：Tomato；Agrobacterium tumefaciens ；Marker-free；Genetic transformation 自 1983 年第 1 株转基因植物问世以来，转基因作物种类和种植面积不断扩大。但是，随 着商业化的转基因植物的不断涌现，人们也越来越