鸡胚接种方法.pptVIP

二、应用 ⒈当动物感染某病毒而发病时，可在机体的相应器官查出病毒。 ⒉病毒进入动物机体，将发生特异性免疫反应，即产生免疫物质——抗体，而抗体90%都存在于动物的血清中。 ⒊病毒相当于免疫效应物质中的抗原。 ⒋抗原和抗体发生特异性结合反应。 ⒌当以被检动物的某一器官为病料，进行HA试验，结果为阳性者，证明该被检材料中有能凝集红细胞的某种病毒。 ⒍凝集价的测定：将被检病毒材料，稀释成不同的稀释倍数，进行HA试验，出现血凝现象的各稀释孔中，能出现病毒的红细胞凝集现象的病毒的最大稀释倍数者即定为凝集价。 ⒎凝集价稀释倍数中所含病毒数叫一个病毒的凝集单位。 ⒏在病毒的红细胞凝集抑制试验（HI试验）中，确定病毒的稀释倍数，应按含有4个病毒凝集单位为标准。 三、实验材料： 　　 96孔V型微量反应板、微量振荡器、病毒材料、红细胞悬液、生理盐水、微量吸液器、注射器、抗凝剂、离心机、恒温箱等。 四、方法与步骤： ㈠制备鸡红细胞悬液： ⒈用注射器抽取抗凝剂。 2.用上述注射器，采用无菌法抽取健康的未免疫鸡的静脉血，与抗凝剂等量。 3.混匀，加生理盐水适量，洗涤离心，共离心三次（第一、二次2000转/分5分钟、第三次3000转/分 8分钟）洗去血清及白细胞。 ⒋所余的纯红细胞，用生理盐水稀释100倍，即成1%的鸡红细胞悬液。 （二）按下表顺序加样 　　　　　　　　　　 弃去.025 试管号 1 2 3 …….. 10 对照 对照 生 理盐水 0.025 0.025 0.025 …….. 0.025 0.025 0.025 病 毒 0.025 0.025 0.025 …….. 0.025 0.025 0.0 红细胞 0.025 0.025 0.025 …….. 0.025 0.0 0.025 病毒稀释 倍数 21 22 23 …….. 210 （三）置于振荡器上振荡1分钟。 （四）37℃恒温箱20分钟观察结果。 （五）判定结果： （＋）凝集反应者，凝集的红细胞呈薄膜状，均匀的复满孔底，有的似有红细胞沉积于中央。 （－）红细胞全部沉于孔底中央，周围无散在的红细胞。 6）观察结果： 一层红细胞均匀地铺于孔壁上者为++++。 基本同上，但边缘不整齐，铺的面积稍小些者为+++。 红细胞形成一个环状，四周有小凝集块者为++。 红细胞形成一个小团，但边缘不光滑，四周有小凝块者为+。 如用鸡红细胞于孔底形成一个小团，边缘光滑有立体感，将板倾斜片刻，就可见红细胞滑动像人的眼泪样为-。 如用豚鼠或人红细胞形成一个小圆圈，边缘光滑无任何小凝集者为-。 “±”即为可疑，计算时以“-”（阴性）处理。 Haemagglutination Dilution 2 4 8 16 32 64 128 256 512 prozone titre 1024 No virus 　病毒的红细胞凝集抑制试验（HI） 　一、 概念 病毒引起的血凝现象能被相应的抗血凝素抗体所抑制，称血凝抑制。利用血凝素特异性抗体与病毒表面相应的HA相互作用，使病毒血凝现象抑制的试验称血凝抑制试验。 血凝原理 血凝抑制原理 ⒈血清学试验：体外的抗原抗体反应叫血清学试验。 ⒉HI试验：病毒的红细胞凝集现象，可以被特异性免疫血清所抑制，称HI试验。 ⒊抗体效价：出现红细胞凝集抑制现象的血清的最大稀释倍数叫抗体效价。 二、动物体内抗体存在情况 ⒈病畜体内，因受病毒抗原刺激，产生大量相应抗体，故体内抗体效价较高。 ⒉健康动物，免疫接种后，因受疫苗（抗原）刺激，而发生免疫应答反应，体内抗体效价较高。 三、实验材料：微量血凝反应板、振荡器、微量移液器、生理盐水、病毒（4个血凝单位）、红细胞悬液、恒温箱、被检血清等。 试管号 1 2 3 …….. 10 对照 对照 血清稀释倍数 21 22 23 …….. 210 生理盐水 0.025 0.025 0.025 …….. 0.025 0.025 0.025 血清 0.025 0.025 0.025 …….. 0.025 0.025 病毒 0.025 0.025 0.025 …….. 0.025 0.025 振荡1分钟，37℃温箱10分钟 红细胞悬液 0.025 0.025 0.025 0.025 …….. 0.025 0.025 振荡1分钟，37℃温箱15—20分钟 四、方法与步骤： 血凝抑制试验结果判定 测定孔 RBC沉于孔底中心，呈纽扣状。(+) 凝集 （-） 血清对照孔：RBC沉于孔底，无自凝 病毒对照孔：