反相高效液相色谱法测定尿液4种肾病标志物论文.docVIP

　　反相高效液相色谱法测定尿液4种肾病标志物论文 孔宇，赵永席，王波，吴红，马国营 【关键词】 糖尿病肾病 Reversedphase high performance liquid chromatography assay for determining 4 kinds of markers of diabetic nephropathy in urine 【Abstract】 AIM: To establish a neance liquid chromatography (RPHPLC) method for assay 4 kinds of nonproteinnitrogen markers of human diabetic nephropathy (DN), creatine (Cr), creatinine (Cn), urea (U) and uric acid (Ua) in DN patients urines. METHODS: The urine samples n (200 mm×4.6 mm, id 5 μm) at the ambient temperature and a , using a 10 mmol/L pH 6.86 phosphate buffer ［consisted 30%(V/V) methanol］ as mobile phase L/min. RESULTS: Baseline separation of the urine could be easily achieved in 5 min after a simple sample preparation. The method also displayed a high reproducibility (RSD values of retention time and peak area ore than 3%) and the calibration curves shool/L, 10-200 μmol/L, 1-30 μmol/L, 10-1500 μmol/L for Cr, Cn, U and Ua respectively. CONCLUSION: This method has great potential for routine assay of clinical urine samples and monitoring DN early. 【Keyance liquid chromatography; diabetic nephropathy; nonprotein nitrogen; urine 【摘要】 目的：建立糖尿病患者尿液中与肾病相关的非蛋白氮代谢产物(肌酸、肌酐、尿素和尿酸)的反相高效液相色谱分离分析方法. 方法：采用Agilent C18（200 mm×4.6 mm, 内径5 μm）色谱柱，流动相含30％(体积比)甲醇和10 mmol/L，pH 6.86的磷酸缓冲溶液，流速0.9 mL/min.freel，柱温为室温. 结果：在5 min内可对患者尿液中上述4种物质同时进行测定，样品前处理简单，重现性较好(迁移时间和峰面积的RSD均≤3%)，线性范围较宽（肌酸：5~300 μmol/L, 肌酐：10~200 μmol/L,.freelmol/L, 尿酸：10~1500 μmol/L）. 结论：此法完全适用于临床上患者尿液的日常分析和早期肾病的监测. 【关键词】 反相高效液相色谱；糖尿病肾病；非蛋白氮；尿样 0引言 糖尿病并发肾病（diabetic nephropathy, DN）是糖尿病患者致死的重要原因之一，已引起了人们的广泛关注. 非蛋白氮代谢产物如肌酸(creatine, Cr)、肌酐(creatinine, Cn)、尿素(urea, U)和尿酸(uric acid, Ua)即是与DN相关的几种物质. 已报道的有关这些物质的分离分析方法主要有比色法［1］、酶法［2］、液相色谱法［3-6］、毛细管电泳法［7-9］等. 其中比色法和酶法通常只能测定单一的物质，而且尿液中的一些内源性物质对测定有干扰；液相色谱法则多集中在对某一种或部分物质的测定上；毛细管电泳测定这些标志物重现性有待于提高. 我们运用反相高效液相色谱法，对DN患者尿液中与DN相关的Cr, Cn, U和Ua这4种非蛋白氮代谢产物进行同时分离检测. 同时测定尿液中的4种物质目前还未见报道. 此法具有快速、灵敏度高和重现性好的特点，完全可运用于临床上患者尿液的日常分析和早期肾病的监测. 1材料和方法 1.1材料Agilent 1100液相色谱仪（美国Agilent公司）；Cr，Cn，Ua均购自Sigma公