吡格列酮对游离脂肪酸介导的βTc3细胞凋亡的干预作用论文.docVIP

　　吡格列酮对游离脂肪酸介导的βTc3细胞凋亡的干预作用论文 .freelmol/L)。检测不同浓度FFA干预后βTc3细胞的增殖抑制率、细胞周期、细胞凋亡率;检测吡格列酮对FFA诱导的βTc3细胞凋亡的干预作用。 结果 FFA干预后的βTc3细胞增殖抑制率随FFA作用时间延长、浓度增加而进行性增加。各浓度FFA干预24 h后βTc3细胞周期于G1/S检测点明显阻滞,凋亡细胞比例增加。吡格列酮干预FFA诱导的βTc3细胞后24 h,βTc3细胞周期阻滞减少,凋亡细胞比例明显减少。 结论 FFA水平异常不利于胰岛βTc3细胞生存,并可诱导βTc3细胞凋亡;吡格列酮有助于维护在FFA诱导下的胰岛βTc3细胞的生存能力,并避免或减少其凋亡。 【关键词】 噻唑烷二酮类 脂肪酸类 菲酯化 胰岛 糖尿病 2型 细胞凋亡 ABSTRACT: Objective To investigate the effects of pioglitazone on FFAinduced apoptosis of βTc3 cell, a pancreatic βcell line in vitro. Methods βTc3 ents mol/L FFA. The Method of MTT easure the proliferation inhibition rates for successive three days after FFA intervention. The changes of cell cycle ent by a floetry. TUNEL ine the apoptosis rate of cells 24 hours after treatment. TUNEL and floetry ine intervention effect of Pioglitazone on the apoptosis of βTc3 cell induced by FFA. Results Inhibition of βTc3 ent of FFA and increased FFA concentrations. Floetry analysis shoent. No obvious abnormal change of cell cycle of βTc3 cell and a substantially decrease of percentage of apoptosis cells after pioglitazone intervention. Conclusion Abnormal FFA level is extremely harmful for survival of βTc3 cell cultured in vitro, but pioglitazone could maintain the surviving ability of insulin βTc3 cell damaged by FFA. KEY I 1640培养基(美国Gibco公司)培养,内含10％小牛血清、2 mmol/L的L谷氨酰胺、100 U/mL青霉素、100 μg/mL链霉素;油酸、棕榈酸(美国Sigma公司);吡格列酮(江苏德源药业有限公司);甲基偶氮唑蓝(MTT,厦门泰京生物有限公司);TUNEL试剂盒(瑞士Roche公司)。 1.2 方法 1.2.1 FFA制备 FFA贮备液中油酸与棕榈酸的比例为2∶1。溶解所需剂量的油酸和棕榈酸于99%乙醇10 mL,振摇1 h。每10 mmol/L FFA加入0.4 g/mL NaOH 40 μL,混匀,置于通风橱中过夜干燥。后加入蒸馏水10 mL,加热溶液至透明皂液样时,加入10%冷小牛血清40 mL,混匀。经0.22 μm CA过滤器过滤消毒后贮存于-20 ℃备用。 1.2.2 吡格列酮配制 吡格列酮5 mg用二甲亚砜(DMSO)溶解,再用DMSO溶液稀释配置成1 mmol/L的母液,过滤除菌,4 ℃保存,使用前用RPMI 1640培养基稀释,培养基中DMSO终浓度≤0.01％。 1.2.3 MTT法测定FFA对βTc3细胞的影响 取对数生长期的βTc3细胞接种于96孔培养板,温育24 h后吸去上清液,每孔加含10%小牛血清的RPMI 1640培养基180 μL。继续温育24 h后,药物组每孔加不同浓度的 FFA 20 μL,使其工作浓度分别为0.25,0.5,1.0 mmol/L,对照组加等量的含10%小牛血清的RPMI 1640培养基。反应结束前4 h吸去培养上清液,每孔加5 mg/mL的MTT溶液50 mL。继续培养4 h后,吸去MTT溶液,每孔加入DMSO 15