奥利亚罗非鱼卵巢芳香化酶基因的克隆及其表达_唐永凯.pdfVIP

第15卷第5期 中国水产科学 Vo l . 1 5 N o . 5 2 0 0 8 年9 月 Journal of Fishery Sciences of China September 2008 1 1 2 1 ， ， ， (1. 中国水产科学研究院 淡水渔业研究中心，农业部水生动物遗传育种和养殖生物学重点开放实验室，江苏 无锡 214081 ； 2. 上海海洋大学 生命科学与技术学院，上海 200090) ：采用 RT-PCR 和快速扩增 cDNA 末端 (Rapid amplifi cation of cDNA ends ，RACE) 法分离出奥利亚罗非鱼 Oreochromis aureus ( ) 卵巢芳香化酶 (P450aromA) 的全序列，得到 1 784 bp 的全长 cDNA，包括 38 bp 5 ′非翻译区， 1 566 bp 阅读框以及含Poly (A) 信号 (AATAAA) 的 167 bp 3′非翻译区 [ 不包括 Poly (A)]。阅读框共编码 521 个氨基 酸，推算的蛋白质分子量为 59 kD 。同源性分析显示，奥利亚罗非鱼 P450aromA 的氨基酸序列与其他鱼类性腺芳香化酶 (P450arom) 具有 70% 以上的同源性，与其他鱼类脑 P450arom 有 60% 左右同源性，但其芳香化酶高保守区包括 I- 螺旋 区、芳香化酶特异保守区和血红素结合区分别与其他鱼类 P450arom 的同源性高达 83%~96%、78%~86% 和 85%~100% 。 系统发育分析表明，奥利亚罗非鱼 P450aromA 属于鱼类性腺 P450arom ，分子系统进化树分析结果与根据传统的形态学 和生化特征分类结果基本一致。生物信息学分析显示，奥利亚罗非鱼 P450aromA 基因编码的蛋白无信号肽，无跨膜区 域，为非分泌型蛋白。同时还含有多个酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点、N- 糖基激化位点、N- 肉豆蔻酰化位点及蛋白激酶C 磷酸化位点。使用 Taqman 探针法检测 P450aromA 在奥利亚罗非鱼成鱼各种组织中的表达。结果发现，P450aromA 只 在卵巢中表达。同时比较了鱼苗、鱼种和成鱼卵巢中 P450aromA 的表达差异，结果显示，鱼苗中无 P450aromA 的表达， 成鱼中 P450aromA 的表达量是鱼种阶段的 30 倍。[中国水产科学，2008，15(5)：729-737] ：奥利亚罗非鱼；RACE ；芳香化酶；Taqman 探针 1005 8737 2008 ：S917 　　　 ：A 　　　 ： - -( )05-0729-09 芳香化酶 (P450arom) 是细胞色素 P450 家族 长慢、个体小，这就常常导致出池规格相差悬殊，从 中的一员，催化某些雄激素转化为雌激素，是雌激素 而降低了鱼产品的产量和质量 [7] 。因此，开展罗非 生物合成中的关键酶和限速酶，广泛存在于大多数 鱼性别决定机制研究以及探索罗非鱼全雄育种技 脊椎动物的脑和垂体中 [1]。在大多数哺乳动物中， 术，对于罗非鱼养殖产业的发展具有重要意义和应 P450arom 由CYP19 单基因编码，但在鱼类中却发现 用价值。本研究分离了奥利亚罗非鱼(Oreochromis 了2 种由不同基因编码的 P450arom，即性腺型芳香 aureus) 卵巢中芳香化酶基因，对其序列进行了比 化酶 (P450aromA) 和脑型芳香化酶 (P450aromB)， 较和分析，并应用实时定量 RT-PCR 研究了该基因 它们以明显不同的形式分别存在于性腺和脑中 [2-3]。 在雌雄鱼不同组织中的表达以及不同发育期的表 研究表明，芳香化酶可以影响哺乳动物中枢神经系 达量，为今后进一步研究该基因在奥利亚罗非鱼性 统的功能和发育，调节神经内分泌和繁殖功能以及 别形成中的作用