固相萃取高效液相色谱荧光检测土壤中喹诺酮类抗生素论文.docVIP

　　固相萃取高效液相色谱荧光检测土壤中喹诺酮类抗生素论文 邰义萍 莫测辉 李彦文 包艳萍 张艳 姚圆 罗晓栋 【摘要】 建立了固相萃取高效液相色谱荧光(HPLCFLD)检测土壤中4种喹诺酮类抗生素的分析方法。样品采用50% Mg(NO3)210% NH3·H2O（96∶4，V/V）超声提取，过HLB柱富集净化，再用乙腈0.067 mol/L H3PO4溶液洗脱。采用高效液相色谱荧光检测器，以乙腈0.067 mol/L H3PO4(用三乙胺调节至pH 2.5)为流动相，于激发波长280 nm、发射波长450 nm处进行检测。土壤样品中4种喹诺酮类抗生素的加标回收率在60.4%～99.3%之间，检出限为0.58～1.0 μg/kg。对蔬菜基地土壤样品分析结果表明，本方法能够满足实际样品的分析要求.freelL， 60 mg），Supelco公司)；C18固相萃取柱(3 mL， 500 mg），Supelco公司)；雷磁PHS3C精密pH计；氮吹仪。 4种喹诺酮类抗生素：诺氟沙星(NOR)、环丙沙星(CIP)、洛美沙星(LOM)和恩诺沙星(ENR)，（纯度＞98.0%，德国Ｄr. Ehrenstorfer公司）。甲醇和乙腈（色谱纯，Sigma公司）；其余试剂均为分析纯；实验用水为高纯水。 标准品母液：准确称取4种喹诺酮类抗生素标准品各0.0100 g, 溶入0.05 mol/L NaOH溶液，并用高纯水稀释定容至100 mL，配制成浓度为100 mg/L的工作母液，在4 ℃下避光保存。50% Mg(NO3)2溶液：称取50g Mg(NO3)2·6H2O溶于100 mL高纯水，室温保存。10% NH3·H2O将２５％的氨水用水稀释１０部，现配现用。0.067 mol/L H3PO4/三乙胺溶液(pH 2.5)：取5 mL H3PO4，加高纯水稀释至1000 mL，滴加三乙胺调pH至2.5。 2.2 样品预处理 称取1.00 g粉碎后风干过0.30 mm孔径筛的土壤样品于10 mL离心管中，加入50%Mg(NO3)210% NH3·H2O（96∶4， V/V） 5 mL，振荡5 min，超声提取15 min，离心（4500 r/min）5 min，收集上清液。残渣再用上述方法反复提取2次。合并提取液，过HLB固相萃取小柱（小柱先后用6 mL甲醇、6 mL水进行预处理）萃取富集。用6 mL高纯水清洗小柱，真空干燥10 min，再用3 mL乙腈H3PO4溶液(5∶1， V/V)洗脱小柱。洗脱液在40 ℃水浴下用氮气吹至近干，用流动相定容至1 mL，溶液过0.22 μm膜，收集滤液于样品瓶中待测。 2.3 色谱条件 )； 4. 恩诺沙星(Enrofloxacin, ENR). 3.2 提取条件的优化 3.2.1 提取液的筛选 喹诺酮类抗生素的极性结构决定了其可溶于有机溶剂和碱性水溶液，且弱碱性时能与Mg2+形成稳定的螯合物１７。因此，选取两种极性有机溶剂的碱性溶液10%乙腈NH3·H2O和10%丙酮NH3·H2O，以及50% Mg(NO3)2溶液和50% Mg(NO3)22% NH3·H2O(96∶4, V/V)4种提取液各5 mL，分别对1.00 g加标（0.5 μg/g）土壤样品中4种喹诺酮类抗生素进行超声提取（30 min），获得4种喹诺酮类抗生素的回收率见图3。可以看出，50% Mg(NO3)22% NH3·H2O（96∶4，V/V）对土壤中4种喹诺酮类抗生素的提取效果均较理想（58.7%～79.1%）。实验进一步考察该提取液添加不同浓度NH3·H2O对提取效果的影响（图4），可以看出，NH3·H2O浓度为10%时4种喹诺酮类抗生素的回收率达69.2%～82.0%。因此，选择50% Mg(NO3)210% NH3·H2O（96∶4，V/V）作为提取液。 3.２.2 提取液用量的确定 提取液用量会影响喹诺酮类抗生素的提取效果。用量太少造成提取不完全；太多则会提取更多杂质。当提取液用量为4 mL时，4种喹诺酮类抗生素的回收率均在70%以上（70.2%～85.0%），高于2 mL（62.6%～77.9%）， 3 mL（61.8%～67.8%）和5 mL（69.4%～80.1%）的回收率。因此，选择1 g土壤样品用4 mL提取液进行提取。 图2 流动相中H3PO4溶液不同配比对喹诺酮类抗生素出峰的影响（略） Fig.2 Effect of mobile phase e of phosphoric acid on separation of quinolone antibiotics a. 乙腈(Ａcetonitrile)H3PO4溶液(Solution)=17∶83,