第十一章核酸合成代谢.pptx

第十一章;概 述;中心法则;第一节 DNA的生物合成;DNA复制的特点;1、DNA的半保留复制; 2、高保真性;（二） 参与DNA 复制的主要物质;2.单链DNA结合蛋白;1、解螺旋酶;3、拓扑异构酶;解链过程中，DNA分子会过度拧紧、打结、缠绕、连环等现象。;拓扑异构酶作用特点 既能水解 、又能连接磷酸二酯键 克服解链过程中的打结、缠绕现象;拓扑异构酶Ⅰ;拓扑异构酶Ⅰ的作用;拓扑异构酶Ⅱ的作用;6、DNA连接酶;; 在复制中起接合双链中单链缺口的作用。 在DNA复制、修复、重组中均起重要作用。 是基因工程的重要工具酶之一。;二 DNA复制的基本过程;1、复制叉的形成;复制原点由DnaA蛋白识别， 在原点由DnaB蛋白（解螺旋酶）将双螺旋解开成单链状态，分别作为模板，合成其互补链(DNA双链的解开还需DNA拓扑异构酶Π 、 SSB),在原点处形成一个眼状结构，叫复制眼。 DNA复制进行时，在眼的两侧出现两个叉子状的生长点，叫复制叉。在复制叉上分布着各种与复制有关的酶和蛋白因子，它们构成的复合物称为复制体 ;2、引发体的形成; 引发体在复制叉上移动，DnaB蛋白活化引物合成酶,引发RNA引物的合成。 领头链先引发开始合成，以原来一条DNA单链为模板（3’ ? 5’),按5’ ? 3’的方向合成一段RNA引物链。领头链开始合成后，后随链也开始合成其引物。引物长度约为几个至10个核苷酸，在引物的5’端含3个磷酸残基（引物酶的底物是核苷三磷酸），3’端为游离的-OH。;; 在DNA聚合酶的催化下，以四种脱氧核糖核苷5’-三磷酸为底物，在RNA引物的3’端以磷酸二酯键连接上脱氧核糖核苷酸并释放出焦磷酸。 DNA链的延伸同时进行,领头链和后随链两条链的合成方向相反。;领头链—在DNA复制时，合成方向与复制叉移动的方向一致并连续合成的链。 随后链—在DNA复制时，合成方向与复制叉移动的方向相反，形成许多不连续的片段，最后再连成一条完整的DNA链。 半不连续复制—在DNA复制时，领头链是连续合成的,而随后链的合成是不连续的，这种复制方式称为半不连续复制。 ; 冈崎片段 在DNA复制过程中，领头链能连续合成，而随后链只能是断续的合成5??3 ?的多个短片段，这些不连续的小片段以其发现者的名字命名为冈崎片段。 冈崎片段大小： 真核生物：100-200个核苷酸（核小体的DNA单位）。 原核生物：1000-2000个核苷酸（相当于一个顺反子）。 ; 当新形成的冈崎片段延长至一定长度，其3’-OH端遇到上一个冈崎片段时即停止合成。 前导链合成随复制叉移动到起始点即停止复制（大肠杆菌只有一个起始点）。; 这时会发生一系列变化：在DNA聚合酶Ⅰ催化下切除RNA引物；留下的空隙由DNA聚合酶Ⅰ催化合成一段DNA填补上；在DNA连接酶作用下，连接相邻的DNA链；修复掺入DNA链的错配碱基。这样以两条亲代DNA链为模板，各自形成一条新的DNA互补链。结果是形成了两个DNA双股螺旋分子。;真核生物中DNA的复制特点;定义:以RNA为模板，按照RNA中的核苷酸顺序合成DNA称为逆转录，由逆转录酶催化进行。 1970年Temin和Baltimore同时分别从劳氏肉瘤病毒和小白鼠白血病病毒等致病RNA病毒中分离出逆转录酶，迄今已知的致癌RNA病毒都含有逆转录酶。 用特异抑制物（放线菌素D）能抑制致癌RNA病毒的复制，而对一般RNA病毒的复制无影响。已知放线菌素D专门抑制以DNA为模板的反应，可见致癌RNA病毒的复制过程必然涉及到DNA。所以Temin提出前病毒的假说。;; 逆转录酶是多功能酶，兼有3种酶的活性： RNA指导的DNA聚合酶活性 DNA指导的DNA聚合酶活性 RNA酶活性;;第三节 RNA的生物合成;相同点：1.都以DNA为模板 2.原料为核苷酸 3.合成方向均为5′→3′方向 4.都需要依赖DNA的聚合酶 5.遵守碱基互补配对规律 6.产物为多聚核苷酸链; 不同点： 复制 转录 模板 两股链均作为模板 模板链作为模板 原料 dNTP NTP 聚合酶 DNA聚合酶 RNA聚合酶 产物 子代DNA双链 mRNA;tRNA;rRNA 配对 A-T；G-C A-U；T-A；G-C 引物 需RNA引物 不需要引物 方