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　　半夏组织培养物中生物碱含量的研究论文 【摘要】 目的探讨不同激素种类和配比的培养基对半夏培养物生物碱合成的影响，为提高半夏有效成分在植物体内的富集提供理论依据。方法采用氯仿提取，依据酸性染料比色法的原理，在417 nm波长下测定，并作方差分析。结果获得良好的线性关系(r=0.998 9)和回收率(100.1%)，RSD为2.3%。MS + 2.0 mg/ml NAA + 0.5mg/ml KT培养基最适合半夏培养物生物碱的积累，平均高达0.980 2%，不含 2.freelg，置 250 ml容量瓶中，加蒸馏水溶解并稀释至刻度，摇匀，制得含盐酸麻黄碱浓度为0. 065 6 mg/ ml对照品溶液。 2.2 样品供试液的制备 精密称取样品粉末，加入12%氨水将材料搅拌至湿润，加入样品量18倍的氯仿浸泡25 h，置70℃水浴锅中回流提取5 h，过滤，残渣以10 ml氯仿分3次洗涤，合并提取液，移至50 ml容量瓶中，用氯仿稀释至刻度，摇匀，精确吸取提取液2 ml置旋转式蒸发仪浓缩至干，加入pH 6. 0缓冲液5 ml，精密加入氯仿10 ml，加0. 1 %溴麝香草酚蓝溶液1 ml，充分振荡，移至60 ml分液漏斗，静置0. 5 h.，分取氯仿层，作为样品供试液。 2. 3 实验条件的选择 2.3.1 最大吸收光谱波长的选择 精密称取样品，按“2. 2”项方法制备样品供试液，并将对照品溶液和样品供试液在380～ 600 nm波长范围内进行光谱扫描，结果两者在417 nm波长处均有最大吸收值，二者的吸收峰完全相同，吸收光谱一致，故选定417 nm作为测定波长。见图1。 2.3.2 稳定性考察 精密称取样品，按“2. 2”项制备样品供试液和空白对照液，在波长417 nm处进行测定，并在室温下每隔20 min测定1次，实验结果表明供试样品液在80 min内显色稳定，RSD= 0. 3%( n= 5)。本实验只考察了80 min内供试液的显色稳定性，因80 min 内完全可以完成测定。 图1 样品和对照品的可见-紫外吸收光谱 2.3.3 标准曲线的绘制 精密吸取对照品溶液0. 1，0. 3，0. 5，0. 7，0. 9 ml，分别加蒸馏水至1. 0 ml，加入5 ml pH 6. 0柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液，精密加入氯仿10 ml和0. 1 %溴麝香草酚蓝溶液1 ml充分振荡，移至60 ml分液漏斗，静置0. 5 h，分取氯仿层，制得对照品供试液。另取1 ml水，以同样方法操作，作空白对照液，在417 nm波长处测定吸光值。以浓度为横坐标，吸光值为纵坐标，求得回归方程为：Y= 0.157 6X+ 0.024 5, r= 0. 998 9( n= 5)，表明盐酸麻黄碱在0. 39～ 3. 47 μg 范围内与吸收度呈良好的线性关系，符合Beer定律。 2.4 精密度与回收率考察 2.4.1 精密度 精密吸取0. 7 ml对照品溶液，按“2. 2”项制备对照品供试液和空白对照液，在417 nm处连续测定吸收度5次，RSD= 0. 06%，表明仪器有较好的精密度。 2.4.2 回收率 取样品粉末0. 657 g左右，精密称定5份，加入盐酸麻黄碱适量，按“2. 2”项制备供试液，在417 nm波长处测定其吸收度，平均回收率为100.1% , RSD为2. 3%。 2.5 样品含量的测定 精密称取样品粉末，按“2. 2”项方法制备样品供试液及空白对照液，在417 nm波长处分别测定其吸收度和计算含量，并用SPSS10.0进行方差分析。结果见表1。表1 不同激素种类配比和生物碱含量的测定结果 从表1可以看出半夏培养物中生物碱含量变化较大，对生物碱含量进行方差分析表明，在不同培养基上所诱导的愈伤组织和分化出的不定芽、不定根、再生块茎生物碱含量差异达到极显著水平(F=95.247 F0.01，其显著性概率Sig.=0.000 0.01)，经Duncan多重比较，不同生长素类和细胞分裂素类浓度配比的培养基对培养物生物碱含量影响较大，与对照相比均达到显著，就每种浓度配比的培养基对培养物的生物碱合成影响大小来说，30号培养基有助于培养物生物碱的合成，生物碱的平均含量达0.980 2%，其次是22号培养基，其生物碱含量达到0.925 9%，仅次于30号培养基，再次是22，10，18，24，14，26，19，17，21，6，13，29，27，15，32，4，28，25，1，23，31，12，20，3，8，11，7，5，2，16号培养基，9号培养基对培养物生物碱的合成相对影响较小，其生物碱平均含量为0.383 6%，各种浓度配比的培养基上所诱导的愈伤组织和分化出的不定芽、不定根、再生块茎的生物碱含量显著高于对照，说明培养基中含有促进培养物合成