细胞工程-第7章-干细胞与组织工程.ppt

（6）OCT基因活性鉴定 OCT基因:ES细胞中特异性表达，常作为标志基因。利用OCT抗血清和间接免疫荧光法可检测ES细胞。也可作为鉴定ES细胞分化与否的依据。 此外，ES细胞发育全能性的标志：ES细胞表面表达时相专一性胚胎抗原（Stage specific embryonicant，SSEA）， 4、胚胎干细胞的保持 　1．常规保持：即通过不断更换培养液，以传代培养方式维持ES的快速繁殖和抑制分化状态。　　2．冷冻保持：通过超低温冷冻保存，使细胞的代谢活动完全停止，而长期保存 总结：胚胎干细胞的建系过程 分离囊胚的内细胞群或分离胚胎生殖脊细胞→ 与饲养层细胞共培养，细胞非分化增殖→ 胚胎干细胞的鉴定与保存→ 定向诱导分化→ 前体细胞→ 功能细胞 干细胞诱导分化的常用方法 7.1.6 ES细胞的应用前景及面临的难题 1、 ES细胞的应用前景 研究哺乳动物个体发生发育规律 研究细胞分化 研究基因功能 生产转基因动物 疾病治疗与治疗性克隆 研究细胞癌变机理及新药物的筛选 制备嵌合体动物 治疗性克隆 嵌合体动物chimera animal 将A动物的胚胎干细胞嵌入B动物的胚胎中创立嵌合体动物，获得移植用机体器官 。 嵌合体意义：可解决哺乳动物远缘杂交的困难，应用于动物育种。 嵌合体动物对发育生物学和遗传学等的研究有重要作用。 2. ES细胞研究面临的难题 （1）.增殖与分化的矛盾 （2）.潜在致癌机制 （3）.器官形成困难重重 （4）.伦理冲突 （1）. ES细胞存在增殖与分化的矛盾 筛选适宜的培养基，平衡体外培养下ES细胞的快速增殖和分化之间的矛盾，筛选ES细胞系的最佳创建条件。 （2）.ES细胞的潜在致癌机制 ES细胞高度未分化，具有形成脐胎瘤的可能，因此必须设计自杀基因，使得ES细胞在治疗过程中万一向肿瘤方向分化时，启动自杀程序，使ES细胞凋亡。 （3）ES细胞用于器官克隆与移植存在的困难 A. 多胚层器官的形成过程复杂； B. 离体器官的体外保存与功能维持困难。 人胚胎干细胞研究伦理指导原则 第四条禁止进行生殖性克隆人的任何研究。 ?第六条进行人胚胎干细胞研究，必须遵守以下行为规范： ????（三）不得将人的生殖细胞与其他物种的生殖细胞结合。 第七条禁止买卖人类配子、受精卵、胚胎或胎儿组织。 如何解决伦理矛盾 不破坏胚胎的情况下获取胚胎干细胞 成体干细胞横向分化 睾丸细胞：胚胎干细胞的新来源 iPS 体细胞诱导多能干细胞 2007年11月20日，美国威斯康星大学詹姆斯·汤姆森的研究小组在《科学》杂志发表体细胞转变成“诱导性多能干细胞”（iPS细胞）的成果，而日本京都大学教授山中伸弥领导的研究小组也于同日在《细胞》杂志发表类似的研究结果。 ips细胞的诞生仿佛给沉寂一时的国际干细胞研究打入了一剂强心剂。? 诱导性多能干细胞iPS cells iPS cells是被重新编程从而进入一个类似胚胎干细胞状态的体细胞。 “ｉPS细胞”具有和胚胎干细胞类似的功能，却绕开了胚胎干细胞研究一直面临的伦理和法律等诸多障碍，因此在医疗领域的应用前景非常广阔。 世界第一只体细胞克隆动物多利羊的培育者、英国苏格兰爱丁堡大学教授伊恩·威尔莫特宣布放弃人类胚胎干细胞克隆研究，转而进行“ｉＰＳ细胞”研究，他认为这种细胞比胚胎干细胞更具潜在优势。 7.2 成体干细胞 1.成体干细胞是指存在于已经分化组织中的未分化细胞，这种细胞能够自我更新并且能够特化形成该类型组织的细胞。 2.成体干细胞存在于机体的各种组织器官中。成年个体组织中的成体干细胞在正常情况下大多处于休眠状态，在病理状态或在外因诱导下可以表现出不同程度的再生和更新能力。 成体干细胞横向分化 3.成体干细胞的优点分析 获取相对容易 源于患者自身的成体干细胞在应用时不存在组织相容性的问题，避免了移植排斥反应和使用免疫抑制剂 理论上，成体干细胞致瘤风险很低，而且所受伦理学争议较少 成体干细胞还具有多向分化潜能 4.造血干细胞 (1). 造血干细胞（hematopoietic stem cell ，HSC）是指骨髓中的干细胞，具有自我更新能力并能分化为各种血细胞前体细胞，最终生成各种血细胞成分，包括红细胞、白细胞和血小板，它们也可以分化成各种其他细胞。 (2).造血干细胞有两个重要特征：其一，高度的自我更新或自我复制能力；其二，可分化成所有类型的血细胞。 (3).造血干细胞移植的作用 (4).造血干细胞移植类型 造血干细胞移植包括骨髓移植（BMT），胎肝造血细胞移植，外周血干细胞（PBSC）移植及脐带血造血细胞移植。 5.神经干细胞 （1）神经干细胞(neuralstemcell，NSCs)是一类具有分裂潜能和自更新能力的母细胞，它可以通过不对等的分裂方式产生神经组织