血清对鸡脂肪细胞分化培养之影响-中国畜牧学会.PDFVIP

中國畜牧學會會誌，38(2) ：109～121, 2009 血清對雞脂肪細胞分化培養之影響 王昭華(1) 黃嵩程(1) 陳珠亮(1)(2) 取自脂肪組織之前脂肪細胞培養被廣泛用於脂肪細胞分化的研究，而血 清為細胞培養液中的主要成分。在雞的脂肪細胞分化培養中，常見使用胎牛血 清或雞血清。由於不同血清的使用常會影響試驗結果，本試驗主要目的在探討 胎牛血清與雞血清對雞脂肪細胞分化的影響。使用取自白肉雞脂肪組織的前脂 肪細胞培養，除了分化試劑外，分別添加胎牛血清或是雞血清誘發細胞分化。 首先以顯微鏡觀察分化過程中細胞形態的變化，並藉oil-Red O脂質染色觀察油 滴堆積情形，結果顯示經雞血清比經胎牛血清誘發分化的細胞顯著地有較高的 油滴堆積形態。相對定量反轉錄聚合酶連鎖反應分析結果顯示，脂肪細胞分化 早期關鍵基因 peroxisome proliferator-activated receptor γ （PPARγ）與專一基因 adipocyte fatty acid-binding protein （aP2 ）mRNA表現，在雞血清處理細胞亦顯 著地高於胎牛血清處理細胞。而經雞血清處理分化成熟的脂肪細胞，其甘油-3- 磷酸去氫酶活性，以及分化相關基因如adipocyte differentiation-related protein （ADRP ）、CCAAT/enhancer-binding protein β （C/EBPβ）、fatty acid synthase （FAS ）、glucose transporter 1 （GLUT1 ）及glucose transporter 8 （GLUT8 ）mRNA 表現，比未分化細胞顯著提高。上述結果顯示雞血清可能比胎牛血清含有較高 促進PPARγ表現之因子組合，以致培養液中使用雞血清比胎牛血清更能有效地 誘發雞脂肪細胞的分化。 （關鍵語：脂肪細胞、雞、分化、血清） 細胞培養是研究脂肪細胞分化的重要方法（Watt, 1991 ）。脂肪細胞培養依細胞來源又分為初代 細胞培養（primary cell culture ）與細胞株培養（cell line culture ）。初代培養之細胞直接由動物脂肪 組織或胚胎，經膠原酵素（collagenase ）分解、分離而取得；脂肪細胞株則是在初代培養，或少數 藉基因重組操作，篩選具脂肪分化能力的不朽化細胞（Novakofski, 2004 ）。相較於動物試驗，體外 細胞培養的試驗環境較單純且易於控制，尤其是細胞株培養；目前我們對脂肪細胞分化與調節機制 的瞭解，主要皆是藉由細胞株培養模式所得（Ntambi and Kim, 2000 ）。而目前使用的脂肪細胞株幾 乎全來自小鼠，並無廣泛使用的畜產動物脂肪細胞株。儘管細胞株提供了研究上很好的試驗模式， (1)東海大學畜產與生物科技學系，407 台中市台中港路三段 181 號 (2)通訊作者，E-mail: clchen@thu.edu.tw 110 中國畜牧學會會誌 第 38 卷 第 2 期 然而不朽化特徵也說明其與動物體內脂肪細胞有明顯的差異。另外，初代培養細胞可以直接取自不 同部位或是不同生長階段動物的脂肪組織，比起細胞株更能真實反應動物體內脂肪細胞的表現。例 如，來自不同部位的前脂肪細胞具有不同的分化能力，其成熟細胞的代謝行為也不全相同 （Rosen et al., 2000 ），而此行為的上的差異在生理功能上往往扮演重要的角色（Reaven, 1988 ）。因此在畜產 動物脂肪組織的生理研究上，初代細胞培養模式變得相當重要。 脂肪細胞的培養除了需提供適合細胞生存的環境與基本營養分外，為使細胞分化，需要添加額 外的誘發因子。Green and Kehinde （1974）首先使用高濃度的胎牛血清於 3T3 纖維細胞培養中，觀 察到某些細胞型