淀粉糊化度测定.docVIP

淀粉糊化度测定自：/html/KJ/KJ-SLYZ/091535614.htmChiang and Johnson, 2007-09-07 试剂： 1. 联甲苯胺（o-Toluidine）试剂：溶解1.5g硫脲于940ml冰醋酸，家60ml甲苯胺，存于有色玻璃瓶中。 2. 乙酸钠缓冲液：溶解4.1g无水乙酸钠与1L蒸馏水，用乙酸调pH至4.5。 3. 葡萄糖淀粉酶溶液：将2g根霉葡萄糖淀粉酶（目录号No.A-7255,Sigma Chemical Co.供货）分散于250ml乙酸缓冲液，用玻璃棉滤纸（Whaatman No.GF/A）迅速过滤，限2小时内使用。葡萄糖淀粉的特异活性是在pH4.5，温度40下生成28.4umol葡萄糖/min/mg蛋白。 操作规程： 1. 制备淀粉部分糊化的样品。将20mg样品分散于50ml离心管中的5ml蒸馏水中。 2. 制备淀粉完全糊化的样品。将20mg样品分散于50ml离心管中的3ml蒸馏水和1ml 1N NaOH中。5分钟后加1ml 1N HCl。 3. 葡萄糖淀粉酶水解和测定葡萄糖。每个离心管加250ml葡萄糖淀粉酶溶液，40保温30min。加2ml 25%的三氯乙酸钝化葡萄糖淀粉酶（并使该酶和其他蛋白沉淀），以16,000×g离心5min。 4. 取0.5ml上清液于试管中，加入4.5ml联甲苯胺（o-Toluidine）试剂，将试管置沸水中10min，用冷水冷却，加5ml冰醋酸，测定在63.nm的吸收率。 按下式计算淀粉糊化度： Y=100*（B-K）/ (A-K) K=A*(C-B) / (A-2B+C) 其中，A=全糊化淀粉的吸收率； B= 全糊化淀粉和经过30min的酶水解的完全淀粉混合物的吸收率； C= 部分糊化淀粉和经过60 min的酶水解的完全淀粉混合物的吸收率； K= 1%完整淀粉经过30min水解后的吸收率。这对每种淀粉或特定处理的淀粉是一个常数，常规分析中只需测=定一次。 这规程也可用来计算总淀粉%；用葡萄糖溶液（720ug/ml）制定标准曲线。按前法第 2步和第3步骤处理样品，根据标准曲线读取葡萄糖浓度。按下式计算淀粉含量： 淀粉总量%=葡萄糖*0.9*100/样品重（干基）