植物细胞培养的基本技术.pptxVIP

第五章 植物细胞工程制药;植物细胞培养技术的基本技术：;一、植物材料的准备; 外植体： 植物组织培养中作为离体培养材料的器官或组织的片段。 在继代培养时，将培养的组织切段移入新的培养基时，这种切段也称外植体。;来源： （1）、生长健壮 在生长健壮的无病虫的植株上，选取发育正常的器官或组织。 原因： a、代谢旺盛 b、再生能力强（比较容易培养成功） （2）、不同部位 ： 靠近植株的近基部比较易成功。 ;外植体;选取： 建立无菌材料时，取材的大小根据不同植物材料而异。 材料太大:易污染，也不需要； 材料太小:多形成愈伤组织，甚至难于成活。 一般选取培养材料的大小，在0.5cm——1.0cm。如果是胚胎培养或脱毒培养的材料，则应更小。 ;用于植物组织培养的外植体最重要的是无菌;无杂菌材料来源：;国家种质库外景;国家种质库长期库内景;一、植物材料的准备;污染的原因 ;植物组织培养时表面处理的常用灭菌剂;常用灭菌剂的效果比较; 氯化汞灭菌效果最好，但去除也最困难，且灭菌时间不宜过长，以免损伤或杀死植物细胞。 氯化汞作为休眠种子的灭菌剂最为理想，适用浓度为0.1%，灭菌时间一般为2~10min，用于有较厚种皮的休眠种子灭菌时，可延长到20min或更长时间。 ;植物材料灭菌后，即可进行培养;二、培养基及其组成;常用培养基;培养基成分;根据无机离子在细胞内的作用分为四大类： 1、大分子的结构成分：主要是C、H、O、N、P、S等； 2、各种酶反应所需的主要离子，包括Ca2+、Cu2+、Mg2+、K+、Na+、Cl－等； 3、各种酶活性所需的基础微量元素，包括：Co2+、Cu2+、Fe3+、Mn2+、Zn2+等； 4、某些生物特殊需要的微量元素，如碘、铯、溴等。 ;无机盐有大量元素和微量元素之分;（2）需要碳源;（3）、需要植物生长调节剂; 到目前为止，已发现植物组织中可以形成5种植物激素： 生长素（最早被发现的植物激素） 分裂素 赤霉素 脱落酸 乙烯 ;生长素： 用来诱导细胞的分裂、愈伤组织形成和根的分化。 组织培养中常用的生长素有： 吲哚乙酸（IAA）：第一个被发??的内源激素，是最先被人工合成的生长调节剂 二氯苯氧乙酸（2,4-D） 萘乙酸（NAA） 吲哚-3-丁酸（IBA） 萘氧乙酸（NOA） 对氯甲苯乙酸（P-CPA） NAA、IAA、IBA易引起生根 2,4-D有利于愈伤组织的诱导和生长;细胞分裂素： 主要促进细胞分裂和愈伤组织上或器官上分化不定芽。 常用的有： 6-苄（biàn）基嘌呤（BAP） 6-苄基腺嘌呤（6-BA） 激动素（呋喃氨基嘌呤、Kinetin、KT） 玉米素（zeatin、zt） 异戊稀氨基嘌呤（2-ip）;植物培养物的生长取决于生长素和分裂素的比例;（4）、需要有机氮源;（5）、需要维生素;三、培养方法选择;植物细胞/组织培养方法分类： 原生质体培养 按 培养对象 分 单倍体细胞培养 固体培养 按 培养基类型 分 液体培养 悬浮细胞培养 按 培养方式 分 固定化细胞培养;固体培养基;固体培养基;固体培养基;液体培养;悬浮培养;悬浮培养;植物细胞大规模培养系统;1、成批培养;成批培养特点： 培养基体积固定培养过程中??细胞生长，其数目不断发 生变化，呈S增长。 成批培养意义： 它是进行细胞生长和细胞分裂的生理 生化研究常用的培养方法。 但要进行下一批培养，则生长一定时间后，需要继代转移。 ;2、半连续培养;3、连续培养; 连续培养意义： 植物细胞代谢调节的研究(某种生长限 速浓度-细胞生长的影响); 次生物质的大量生产。 ;4、固定化培养法;固定化培养法突出优点： 细胞位置固定， 易于获得高密度细胞群体及维持细胞间物理化学梯度； 利于细胞组织化， 易于控制培养条件及获得较高含量的次级代谢产物。; 谢谢观赏