植物胚胎培养.pptVIP

复习思考题 植物胚胎培养分为哪些类型？各有何特点和要求？胚胎培养有何重要意义？ （2）防止幼胚早熟萌发的方法 ①提高培养基渗透压。胚龄越小要求的渗透压（糖浓度）越高，高糖浓度控制幼胚早熟萌发的效果早已被证实。下述实例阐明不同胚龄对糖浓度的要求。 ②提高无机盐浓度。提高无机盐浓度也是为了提高培养基渗透压。可加入适量的NaCl以提高渗透压，浓度一般为0．2％－0．4％，超过0．8％对胚有毒害作用。 ③加人甘露醇提高渗透压。甘露醇的浓度为1．l％－5．5％，以部分地代替蔗糖，使幼胚在等渗条件下继续胚性发育。 （二） 培养基酸碱度对胚性发育的影响 培养基酸碱度对胚性发育也是非常重要的。通常胚培养所用pH值的范围为5.2-6.3。因植物种类不同而有所差异。 如： 荠菜： 5.4－7.5 桃：5.8 曼陀罗：5.0一8.1 水稻：5.0 番茄： 6.50 大麦：4.9 (三) 环境条件对胚性发育的影响 1）光照条件： 由于胚在胚珠内发育是不见光的。一般认为在黑暗或弱光下培养幼胚比较适宜。光照对胚胎发育有轻微抑制作用，离体培养条件下，幼胚正常胚性发育对光的要求，还应根据植物种类来决定。 光照可以促进某些植物的胚转绿，利于胚芽生长，而黑暗利于胚根生长。因此以光暗交替培养较为有利。 棉花：胚先在黑暗中培养，然后转人光照下培养，子叶的叶绿素生成很慢；而转人弱光下培养的幼胚，子叶很容易产生叶绿素。 芥菜：胚培养每天以 12 h光照比全暗条件好。 2）温度条件： 因植物种类而异，幼胚培养与其他器官培养无多大区别。对于大多数植物的胚来说，在25～30℃为宜，但是，早熟果树如桃的种胚，必须经过一定的低温春化阶段才能正常萌发生长，而马铃薯胚以20℃为好。 7.3 胚乳培养 7.3.1 胚乳离体培养的意义 被子植物的胚乳是双受精的产物，是由精细胞和二个极核融合而成，故胚乳细胞为三套染色体。但是由于胚囊类型不同，参加融合的极核数目不同，胚乳的倍性亦不同。如待宵草型胶囊只有一个极核与精细胞融合，胚乳核为2n；贝母型胚囊两个极核，其中一个是n，另一个是3n，与精细胞融合后胚乳核为5n；椒草型胚囊中有8个极核，与精细胞融合后胚乳核为9n。 胚 囊 至今，尚未见到胚乳细胞在自然状态下器官发生的报道。最早报道由玉米胚乳离体培养得到可连续生长的愈伤组织（Lampe等，1933）。后来在巴婆(番荔枝科)、黄瓜（葫芦科）、黑麦草（禾本科）、蓖麻（大戟科）、桑寄生科、檀香科等植物相继报道由胚乳培养得到愈伤组织。最先报道由胚乳组织培养而器官发生的是柏形外果（檀香科）的芽分化（ Johri等，1965）；通过离体胚乳培养第一个得到三倍体的植物是罗氏核实木（大戟科）（Johri，1978）（表7－2，表7－3）。 当前胚乳离体培养的研究进展： 1)仅能形成愈伤组织的有：巴婆、黑麦草、黄瓜、檀香、小麦、沙针、美洲懈寄生、澳洲根寄生。 2）达到器官分化水平的有：玉米、蓖麻、巴豆、麻疯树、变叶木、黑种草、葡萄荷叶芹、桃、柏形外果、印度五蕊寄生、白花寄生、酸细檀、怒江钝果寄生、楔叶钝果寄生。 3）能形成完整植株的有：罗氏核实木、大麦、水稻、苹果、抽、橙、马铃薯、桃、荷叶芹。 目前为止，约有30种被子植物的胚乳培养，达到不同程度的细胞分裂和器官分化。说明胚乳组织也具有发育成植株的潜在能力。在应用上胚乳培养为植物界创造新种提供了一条可行途径。 7.3.2 胚乳培养的方法 取有胚乳的果实或种子，进行表面灭菌，然后在无菌条件下剥离胚乳接种培养。培养时有带胚培养和不带胚培养两种方式。 带胚培养胚乳组织容易成功，不带胚培养胚乳组织成功率低。 取授粉4～8天后的幼果，常规消毒后，在无菌条件下切开果实，取出种子，小心分离出胚乳。接种在培养基上，可用MS、White等，加入2，4-D或NAA0.5～2.0mg/l，BA0.1～1.0 mg/l。在25～27℃和黑暗条件或散射光下培养,约6～10天胚乳开始膨大,再培养形成愈伤组织。这时应转到分化培养基上培养,分化培养基可加入0.5～3.0 mg/l的BA及少量的NAA。待愈伤组织长出芽后,切下不定芽,插入生根培养基中，光下培养10～15天,切口处可长出白色的不定根。 7.3.3 胚乳培养的技术关键 (一) 胚乳发育时期的影响 双受精后的胚乳核，先分裂形成游离核。把这一时期的胚乳称为“游离核期”。继续发育后形成细胞壁，即形成许多小的细胞。这一时期称为“胚乳细胞期”，见图7－1。 游离胚乳核　 受精卵 一　受精