不同来源的粉葛中总黄酮和葛根素的含量测定论文.docVIP

　　不同来源的粉葛中总黄酮和葛根素的含量测定论文 王春怡 杨方明 李卫民 高英 【摘要】 目的考察不同来源粉葛中总黄酮、葛根素的含量。方法采用紫外分光光度法（UV）测定总黄酮含量；采用高效液相色谱法（HPLC）测定葛根素含量，kromasil C18色谱柱(4.6 mm×250 nm，5μm)，流动相为甲醇－水（33：67），流速为1.0 ml·min-1，柱温30℃，检测波长为250 n m。结果总黄酮含量为0.53%～1.03%，回收率为99.69%.freelsonii Benth的干燥根，自古与野葛同作中药葛根用，具有解肌退热，生津，透疹，升阳止泻之功效［1］，临床应用广泛。2005年版《中国药典》首次将粉葛作为分列中药材记载。粉葛中的主要生物活性成分有葛根素等异黄酮类化合物［2］，具有降血压、扩张冠状动脉等多种生物活性，同时粉葛又富含淀粉，因此具有较高的医用和食用价值，现已开发出粉葛淀粉系列多种保健食品。目前，粉葛的栽培面积不断扩大，并出现了许多栽培品种，因此不同来源药材之间有效生物活性成分的含量会有较显著的差异，从而影响药材质量。广东、广西为粉葛药材的主要产地，药源丰富，本文采用比色法及高效液相色谱法对广东、广西所产的不同来源的粉葛中总黄酮及葛根素的含量进行了比较，为粉葛药材质量控制提供实验依据。 1 仪器与材料 1.1 仪器P680高效液相色谱仪(戴安公司)； satorius BS 110S 精密天平；unic uv-2100紫外分光光度计（尤尼柯上海仪器有限公司）。 1.2 药材粉葛，产地：广东、广西，经广州中医药大学中药鉴定教研室鉴定，均为豆科植物甘葛藤的干燥根。（来源见表1） 1.3 试药葛根素标准品（中国药品生物碱制品检定所，批号110752-200511）。甲醇（色谱纯，德国Merck公司），乙醇（分析纯，天津大茂化学试剂厂），水为高纯水。 2 方法与结果 2.1 UV法测定不同来源粉葛中总黄酮的含量 2.1.1 溶液的制备 对照品溶液的制备：精密称取80℃干燥至恒重的葛根素对照品5.0 mg，置25 ml容量瓶中，用95％乙醇溶解并稀释至刻度。 供试品溶液的制备：取不同来源粉葛粉末（过三号筛）约1.0 g，精密称定，置锥形瓶中，精密加入30％乙醇100 ml，称定重量，加热回流30 min，放冷，再称定重量，用30％乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液1ml置10 ml容量瓶中，用30％乙醇定容，即得。 检测波长的选择：取对照品溶液1.0 ml置10 ml的容量瓶中，加蒸馏水至刻度，摇匀，在200～800 nm波长范围内测定葛根素的紫外吸收光谱，结果显示在250 nm处有最大吸收。另取供试品溶液在200～800 nm波长范围内测定紫外吸收光谱，结果也显示250 nm处有最大吸收，所以选择250 nm为检测波长。 2.1.2 线性关系考察精密量取对照品溶液0.2，0.4，0.6，0.8，1.0 ml，分别置10 ml容量瓶中，并各加95％乙醇至1 ml，再加蒸馏水至10 ml，摇匀，以1.0 ml 95％的乙醇加蒸馏水至10 ml的溶液为空白对照，于250 nm测定吸光度。以葛根素含量为横坐标（X），吸光度为纵坐标(Y)，绘制标准曲线，得回归方程Y=75.45X－0.01，r=0.999 9。结果显示，葛根素对照品在0.04～0.2 mg内线性关系良好。 2.1.3 精密度试验取同一浓度的葛根素对照品溶液，重复测定5次，吸光度平均值为0.592，RSD为0.09％，表明仪器精密度良好。 2.1.4 稳定性试验取同一样品溶液，在0，2，4，12，24 h测定，吸光度平均值为0.690， RSD为0.22％，表明本品24 h内具有良好的稳定性。 2.1.5 重复性试验取同一批次的粉葛药材6份，按供试品溶液制备方法制成样品测定，测得样品葛根素含量平均值为0.93％，RSD为0.49%，表明本法具有良好的重复性。 2.1.6 准确度试验称取6份已知葛根素含量的粉葛药材粉末1.00 g，加入对照品约1.0 mg，按供试品溶液制备方法制成样品，测得平均回收率为99.69%，RSD为1.8%，表明总黄酮回收率良好。 2.1.7 样品总黄酮含量测定取各来源的粉葛药材3份，精密称定1.0 g，按供试品溶液制备方法制成样品，依法测定。结果表明，广州市清平药材市场所售广东产粉葛总黄酮含量均较高，可达1.03％，平均质量优于广西产粉葛。见表1。 2.2 HPLC法测定不同来源粉葛中葛根素的含量 2.2.1 色谱条件色谱柱为kromasil C18色谱柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；柱温：30℃；流动相：甲醇－水 (33：67)；检测波长250 nm；流速：1.0 ml·m