家蝇抗菌肽分子结构及抗菌谱研究论文.docVIP

　　家蝇抗菌肽分子结构及抗菌谱研究论文 周义文 申萍 涂植光 尹一兵 陈辉 孟江萍 王小中 陈如山 卢亮 陈正庚 【摘要】 目的 研究家蝇抗菌肽的分子结构和抗菌谱，寻找广谱高效天然抗菌肽。方法 家蝇被损伤感染诱导免疫后制成组织匀浆，用蛋白质纯化技术分离纯化抗菌肽，测定抗菌活性及抗菌谱，纳升电喷雾飞行时间质谱测定氨基酸序列。结果 家蝇组织提取液经蛋白质纯化，得到一纯化的抗菌活性成份，纳升电喷雾飞行时间质谱测序，得到两个肽段的氨基酸序列：肽段1.QPNLYYNK和肽段2. PNNVYYTK。通过NCBInr蛋白质数据库检索.freelol/L。结论 本文得到的抗菌肽是一个新型抗菌肽，有广谱抗菌活性，对革兰阴性菌和革兰阳性菌均有一定的抑制作用。 【关键词】 家蝇抗菌肽； 抗菌谱； 分子结构； 氨基酸测序 ABSTRACT Objective To investigate the broad spectrum and high effective natural Musca domestica antibacterial peptide, and study its molecular structure and antibacterial spectra. Methods Musca domestica ogenate, and antibacterial peptide ino acid sequenced by Nano-ESI-Q-TOF2-MS/MS techniques. The antibacterial activity and spectra ined by plate (KB) and dilution method. Results Musca domestica tissue homogenate , and an antibacterial ponent obtained, it ino acid sequence of tryptic hydrolysis fragments atch the antibacterial peptide. The 11 clinical strains (P.aeruginosa, E.coli, S.typhi, P.vulgaris, C.diversus,.freeloniae, E.cloacac, S.flexneri, S.epidermidis, Methecillin Resistant Staphylococcus and C.albicans) could obviously be inhi-bited by the antibacterial peptide，and MICs (μmol/L) ol/L, 2.22μmol/L, 4.44μmol/L, 6.67μmol/L, 3.33μmol/L, 6.67μmol/L, 5.0μmol/L, 6.67μmol/L, 4.44μmol/L, 4.44μmol/L and 13.33μmol/L respectively. Conclusions It is a neicrobial activity, and display inhibition against Gram negative bacilli, positive coccus and C.albicans. KEY usca domestica antibacterial peptide; Antibacterial spectra; Molecular structure of antibacterial peptide; Amino acid sequencing 抗生素的广泛应用，耐药菌株和多重耐药菌株日益增加，临床抗感染治疗已面临严峻挑战，寻找广谱高效的抗细菌、抗病毒药物，仍然是一个十分艰巨的任务。抗菌肽(antibacterial peptides)有非特异性地抗细菌、真菌、病毒等病原体作用，还可能具有抗肿瘤细胞的作用［1，2］，是一类具有发展潜力的新型药物。 蝇生长在腐物、粪便和垃圾等含有大量细菌的恶劣环境中，其自身却不会因为感染病原菌而引起死亡，这说明蝇应该对病原微生物有强大的免疫力。对家蝇资源的利用国外已投巨资作为高科技产业进行开发，我国还处在起步阶段。本研究从家蝇幼虫体内分离到了一种广谱抗菌活性肽，并测定了其抗菌谱和部分氨基酸序列，现报道如下。 1 材料和方法 1.1 菌株和家蝇 (1)标准菌株 大肠埃希菌ATCC25922、铜绿假单胞菌ATCC27853和金葡菌ATCC25923购自卫生部临床检验中心。 (2)临床分离菌株 铜绿假单胞菌(P.aerugi-nosa)、大肠埃希菌(E.coli)、伤寒沙