禽流感病毒H5亚型RT-PCR检测试剂盒使用说明书.PDFVIP

禽流感病毒H5 亚型RT-PCR 检测试剂盒使用说明书 用途 禽流感病毒H5 亚型（AIV-H5 ）反转录聚合酶链反应（RT －PCR ）检测试剂盒，用于检测 禽组织、分泌物和排泄物中的AIV-H5，适用于AIV-H5 的诊断、检测和流行病学调查。 原理 利用离心柱内硅基质膜提取RNA ，在反转录酶的作用下，以RNA 为模板，以引物为起点 合成与RNA 模板互补的cDNA 链。在TaqDNA 聚合酶的作用下，经高温变性、低温退火、中温延 伸的循环，使特异DNA 片段的拷贝数放大一倍。经过35 次循环，最终使扩增DNA 片段放大了数 百万倍。将扩增DNA 片段进行电泳，经染色后，在紫外灯照射下，肉眼可见到DNA 片段的扩增带。 试剂盒组成 名称 10 头份 50 头份 贮藏条件 0.2 mL 薄壁PCR 管 15 个 60 个 吸附柱和收集管 10 套 50 套 裂解液 6 mL 30 mL 洗液 12 mL 60 mL 洗脱液 1 mL 10 mL 室温（A 盒） 矿物油 300 µL 1.2 mL 50 倍TAE 电泳缓冲液（50 倍稀释后使用） 20 mL 100 mL 染色液 20 µL 50 µL 上样缓冲液 50 µL 250 µL 阴性对照 350 µL 1 mL 阳性对照 350 µL 1 mL RT-PCR 反应液 200 µL 1 mL -20 ℃（B 盒） X 液 5 µL 10 µL 酶混合液 15 µL 65 µL 保存期 本产品有效期为6 个月。 需自备的物品 1．仪器：分析天平、离心机、PCR 扩增仪、电泳仪、电泳槽、紫外凝胶成像仪（或紫外分析仪）、 微波炉、组织研磨器、-20 ℃冰箱、可调移液器（2 µL、20 µL、200 µL、1000 µL）。 2 ．耗材：眼科剪、眼科镊、称量纸、20 mL 一次性注射器、生理盐水、琼脂糖、500 mL 量筒、500 mL 锥形瓶、经焦碳酸二乙酯（DEPC ）水处理的灭菌1.5mL 离心管和吸头（10 µL、200 µL、1000 µL）、 灭菌双蒸水。 注意事项 1．所有接触病料的物品均应合理处置，以免污染实验室。 2 ．PCR 整个试验分配液区、模板提取区、扩增区、电泳区。流程顺序为配液区→模板提取区→扩 增区→电泳区。严禁器材和试剂倒流。 3 ．所有试剂应在规定的温度储存。-20 ℃保存的各试剂管使用前应完全融化，8000 rpm 离心15 s， 使液体全部沉于管底，放于冰盒中，吸取液体时移液器吸头尽量在液体表面层吸取，使用后立 即放回-20 ℃。 4 ．在RNA 提取过程中，避免RNA 酶污染，尽量缩短操作时间。 电话：01021/22 E-mail ：PCR@ 网址： 5 ．染色液低毒，操作时应戴上手套，避光保存，较长时间不使用请存放于 4℃，以免挥发变干。 染色液和上样缓冲液使用前也请离心使液体沉于管底。 6 ．注意防止试剂盒组分受污染。不要使用超过有效期限的试剂，试剂盒之间的成分不要混用。 7 ．严格遵守操作说明可以获得最好的结果。操作过程中移液、定时等全部过程必须精确。 8．