菜薹杂交种ISSR和SRAP的指纹图谱构建.pdfVIP

畏弘互粜(学术版) 2010(20)：18—20 JOURNALOFCHANGJIANGVEGETABLES 一18一 DOI：10．3865，j．issn．1001—3547．2010．20．007 菜薹杂交种ISSR和SRAP的指纹图谱构建 冒维维1，孙敬东1，陈学好2 (1．江苏泰州市作物栽培指导站，225300；2．扬州大学园艺与植物保护学院) 摘 要：利用ISSR和SRAP两种分子标记技术，对l份菜薹杂交组合进行分析。结果表明，3个ISSR引物和3对 SRAP引物可扩增出供试材料双亲的互补特征带，将双亲及杂种Fl区分开；另有2个ISSR引物也可有效鉴别双亲 及杂种Fl。从而建立了由ISSR和SRAP两种标记技术组成的鉴定该杂交组合的分子指纹图谱，并转化为数字指纹 图谱。为菜薹种子纯度的鉴定开辟了新的技术途径，为菜薹新品种知识产权的保护提供了重要手段。 关键词：菜薹；ISSR；SRAP；指纹图谱；数字指纹 我国大面积栽培的蔬菜．大部分使用了杂种一 SRAP技术在构建菜薹指纹图谱方面的应用。本研 代。菜薹属十字花科芸藿属作物，具有花期自交不 究利用ISSR和SRAP标记技术对1份菜薹杂交组 亲和的特性．杂种一代的应用较为普遍。为了充分 合进行分析，旨在鉴定出双亲及其杂种一代，作为 发挥杂种一代的优势．最根本的是要保持一代杂种 鉴定杂种真伪及种子纯度的方法。并为开展分子标 的纯度。十字花科作物杂交制种过程中由于管理措 记辅助选择奠定基础。 施不当和自交不亲和等而常常产生自交种子，即假 1材料与方法 杂种，降低杂交种的纯度。采用传统的田间形态特 1．1试验材料 征检测种子纯度。费工费时。且一些品种之间植物 所用材料为菜薹杂交组合TD601×C1D7，其 形态非常接近。很难鉴别。 DNA分子标记技术的出现，有效地提高了遗传 州帮达蔬菜研究所试验田，待幼苗长至5～6片真叶 分析的效率和准确性，已在遗传研究和育种实践中 时取嫩叶提取基因组DNA。 发挥了巨大作用。随着分子标记技术的日益成熟和 1．2试验方法 普及，分子标记在品种指纹图谱绘制、品种纯度检 ①DNA的提取及检测采用改良过的cTAB 测等方面也起到越来越重要的作用。迄今。已经有 法提取基因组DNA。 多种分子标记技术应用于多种作物的种子纯度鉴 ②PCR扩增及产物检测ISSR扩增反应体系 定，其中又以RAPD、ISSR、SRAP和AFLP等最为常 buffer，模板DNA 的总体积为20恤L，包括1×PCR 见11】。张增翠等I习利用AFLP技术构建了不结球白菜 30 U，dNllP250斗mol／L，引物0．25 矮抗6号的指纹图谱：尹贤贵等【3】利用RAPD技术 ng，Taq酶l mmol／L。 构建了番茄品种渝粉109的指纹图谱：赵丽萍等14】 卜mol／L，Mg舢2．5 利用SRAP与AFLP技术分析了7个萝卜品种的指反应程序为94℃预变性5min，94℃变性1min，