外周血染色体考核.docVIP

外周血染色体收获（考核） 实验前准备 检查是否有足够的0.075MKCl、甲醇、乙酸、秋水仙素和玻片 检查水浴箱的温度是否37℃ 记录当天的温度和湿度 37℃预温低渗液 打印当天收获的病人名单 实验 加入50g/mL的秋水仙素，充分摇匀 放入37℃培养箱继续培养12min 离心1500转/分6分钟 去上清，震荡器混匀，加入0.075M氯化钾溶液8mL，加盖，颠倒混匀 37℃水浴，如湿度高于35%温育20分钟，如湿度低于35%则温育25分钟 预固定：去上清，震荡混匀，加入新鲜的预固定液（甲醇：冰醋酸=95:5）5mL，加盖，轻轻混匀。 离心1500转/分6分钟 弃去上清后，震荡混匀悬液，加入预先冰冻过的固定液9mL，加盖，颠倒混匀 室温放置30分钟 离心1500转/分6分钟 弃去上清后，震荡混匀悬液，加入固定液9mL，加盖，颠倒混匀 放入4℃冰箱过夜 实验用具归位，工作区域消毒清洁 第一次固定之前，预先把配好的3:1固定液放4℃冰箱冰冻后再加入，效果更好些 标本接种量多少（接种培养基种类、为何两瓶） 、最佳温度、湿度（接种、滴片、显带） 标本污染如何处理 滴片注意问题（滴片的标本数量、镜检不出现核型及多少个核型为佳） 染色如何选择、改变胰酶处理以及吉姆萨工作液染色时间 预固定试剂也可选择3:1，如何根据实验室条件选择比例 烤片的温度以及时间 PBS缓冲液成分分析 阅片：镜下计数20个核型，分析5个核型，电子核型图片保存两张 外周血染色体滴片（考核） 实验前准备：玻片清洁 洗洁精擦拭每张玻片 清水冲洗每张玻片 蒸馏水冲洗玻片，无水乙醇浸泡3小时以上 蒸馏水冲洗、浸泡、放4℃冰箱备用 实验 将冰箱过夜的标本离心1500转/分6分钟 弃去上清，根据细胞沉淀，留1-2mL的上清，轻轻混匀 对光检查细胞悬液的情况，如较浑浊则加入数滴固定液，至悬液变成半透明状，如细胞悬液非常清澈，切勿再加入固定液 每份标本必须接种两种不同培养基，滴片时首先将两只试管各滴片一张 用10×的低倍镜观察核型情况，选择核型好的试管进行滴片 实验用具归位，工作区域消毒清洁 外周血染色体G显带（考核） 一．实验前准备 1、0.035%浓度的胰酶50mL 放置30-60分钟平衡至室温 2、检查水浴箱的温度是否37℃ 3、50mL WashⅡ和胰酶放置37℃水浴箱预温 4、50mL 的PBS缓冲液加4管吉姆萨工作液 二．实验 1、胰酶浸泡时间10-12秒（视情况） 2、WashⅡ 10秒 3、吉姆萨工作液中2-3分钟 4、蒸馏水冲洗 5、吹风机吹干玻片 6、镜下观察显带情况 7、实验用具归位，工作区域消毒清洁。