骨髓切片制作.docVIP

骨髓活检切片制作技术 —、取材 1 术前准备：取1.5EP管，放入Bouin氏液或2.5%~3.8%戊二醛固定液70—80ML。 载玻片6片 2 穿刺 一步法 二、固定 Bouin固定液：苦味酸饱和水溶液 75ml 福尔马林（40%甲醛） 20ml 冰醋酸 5ml Bouin氏液固定30-60分钟，若组织块大或增生活跃的标本可适当延长时间，但不宜超过3小时。 三、脱水 1 取出固定液中组织块，放入清水中漂洗（去除血块，若骨髓组织少并且带有血块可不去除，一面破坏组织块），与写好的标签一同放入一块小纱布，大头针固定，放入清水漂洗2-3次。 2 脱水 （1）留置固定10分钟：水浴箱内 组织块 +60%乙醇+70%乙醇，45℃水浴，10分钟。 （2）组织块移入60%（一次）乙醇瓶内，依次70%（一次）80%（一次）95/96%（二次）100%（二次）乙醇，45℃,10分钟。 注：乙醇可重复使用。 3 包埋（使用塑胶包埋法） （1）经脱水处理后的组织块用针头挑入特制的聚乙烯模具中，用滴管吸取Hemapun865甲液滴入模具中，装满模具(约20ml)，4℃冰箱中浸入1-2小时。 （2）先取出组织块。用8号针管吸取Hemapun865乙液，滴三滴入模具，迅速将甲乙两液搅匀，后将组织块摆在模具底部中央。 （3）放入-20℃冰箱，或者室温静置20分钟，或4℃冰箱静置40-60分钟，待其自聚. （4）在包埋块顶部尚湿润时贴上标号标签。 四 切片 每份标本切3微米：用于HGF、HE染色，切片备用。 5微米：用于Gomori染色。 一般先切5微米，每种染色放三条。 1 先用钢锉休整聚合块底部两侧，使之尽量锉至组织块，随即装入轮转式切片机，调节所需厚薄度，切除底部聚合块无组织块部分。 2 一般先切5微米。均匀摇动切片机，右手用弯头镊子轻轻钳牢已切割下来的组织片，左手用毛笔协助将其取下，用镊子轻轻使每张切片充分平坦于水面。 3 贴片 选择完整且无皱褶的组织片，左手拿玻片垂直入水，去贴附切片，右手拿镊子帮助推动，使组织片贴附玻片三分之一处。一般每张玻片贴附3条。 4 放在60℃-80℃的电热板或自制烤片架上充分烘干，或过夜，后染色。 五 染色 1 HGF染色 （1）切片充分干燥后，Harris苏木素染色2-3分钟，流水冲洗，热水浸一下，干燥。 （2）Gimesa染液染2-3分钟，流水冲洗，热水浸一下，干燥。 （3）1%酸性品红液染色，10-20s，流水冲洗，干燥。 （4）载玻片上加中性树胶一滴，加盖玻片。 2 Gomori染色 （1）试剂 含氨银溶液：10%硝酸银溶液10ml（4份）+10%氢氧化钾水溶液2.5 ml（1份），立即发生灰黑色沉淀，然后一滴一滴加入26%-28%氨水，随时不停摇动容器，直至沉淀粉完全溶解，即停止滴入氨水。再逐滴谨慎加入10%硝酸银溶液，至溶液稍浑浊，出现振摇后易消失的沉淀物为止。最后在此液内加入二倍量蒸馏水。 0.5%过锰酸钾溶液 过锰酸钾0.5克+蒸馏水100ml 2%偏重亚硫酸钾溶液 偏重亚硫酸钾2克+蒸馏水100ml 2%硫酸铁氨（铁明矾）溶液 硫酸铁氨2克+蒸馏水100ml 20%福尔马林溶液 甲醛液20ml+蒸馏水80ml 0.2 %氯化金溶液 储存氯化金溶液20 ml+蒸馏水80ml 2%硫代硫酸钠 硫代硫酸钠2克+蒸馏水100ml （2）步骤 切片用0.5%过锰酸钾溶液氧化1分钟. 流水洗2分钟，干燥。 2%偏重亚硫酸钾水溶液脱水1分钟. 流水洗2分钟，干燥。 2%硫酸铁氨（铁明矾）溶液敏化1分钟。 流水洗2分钟，完全干燥。 蒸馏水漂洗30s，2次。完全干燥。 浸于含氨银溶液2-3分钟。 蒸馏水漂洗20s. 浸于20%福尔马林溶液内还原2-3分钟。 流水洗3分钟，干燥。 浸于0.2 %氯化金溶液调色10分钟。 蒸馏水漂洗30s。干燥。 载玻片上加中性树胶一滴，加盖玻片。