实验04 多线染色体观察.docVIP

实验染色体一、 实验目的 1、练习剥离果蝇三龄幼虫唾液腺的技术和制作唾液腺染色体的方法； 2、观察多线染色体的特征。 二、实验原理 唾腺染色体是处于体细胞同源染色体的配对状态，它们的巨大性是由于重复分裂后的众多染色线没有分开的结果，因此又称为多线染色体。多线染色体是处于早前期的一种体细胞染色体配对形式。它普遍存在于双翅目昆虫某些物种的幼虫唾腺细胞内。唾腺染色体经染色后，出现深浅不同、疏密各别的横纹，这些横纹的数目和位置往往是恒定的，代表着种的特征。如染色体有缺失、重复、倒位、易位等，很容易在唾腺染色体上识别出来。 三、实验材料 1、材料：果蝇的三龄幼虫 2、用具：双筒解剖镜、显微镜、解剖针、载片及盖片、吸水纸、蒸馏水等 3、药品：改良的苯酚品红、生理盐水（0.7% NaCL）、1mol/LHCl 剥离唾腺：取载玻片于双筒镜下，滴一滴生理盐水，幼虫置于生理盐水内，两手各持一解剖针，左手压住幼虫前端1/3处，固定幼虫，右手按住头部黑点处（口器）稍后，向前轻轻移动，把头部自身体拉开，腺体即随之而出，剔除脂肪。 解离：拉出的腺体移到载片中央，加一滴1mol/LHCl，解离2-3min。 染色 ：用吸水纸吸去HCl加1滴蒸馏水轻轻冲洗后，小心吸干。加1～2滴改良苯酚品红染色10～15min。 压片、镜检：加盖玻片，覆以吸水纸压片镜检。 流程：剖取唾腺→转到载玻片上→加1mol/LHCL酸解2-3min →吸去HCl→水洗→苯酚品红染色10-15min →盖片、压片→镜检 、作业 绘制所观察到的多线染色体图。 注意事项 1.一定加生理盐水，否则唾腺易干。 2.将脂肪组织清除干净。 3.水不可太多，否则幼虫会漂浮而且活跃。 4.染色时间不可过长，否则背景也着色。 5.压片时要揉。 6.染色完以后，将旧的染色液吸去，加新的染色液，再压片。 发现：1881年，意大利的细胞学家巴尔比尼（Balbiani)在双翅目昆虫摇蚊幼虫的唾腺细胞间期核中发现了一种巨大的染色体，由于存在于唾腺细胞中，所以又称为唾腺染色体。1933年，美国学者贝恩特（Painter）等又在果蝇核其它双翅目昆虫的幼虫唾腺细胞间期核中发现了巨大染色体。这种染色体宽约5μm，长400μm，相当于普通染色体的100-150倍，因而又称为巨大染色体。 基本概念 核内有丝分裂：不伴随核分裂和细胞分裂的染色体分裂。 核内复制；不伴随细胞内核分裂的染色体复制现象。 体联会：唾腺细胞中的染色体复制后，所有同源染色体一直处于紧密配对的前期状态，如同减数分裂的联会，这种现象称为体联会。 果蝇的染色体组成 果蝇共有4对染色体。其中一对为性染色体（XY或XX），XX染色体为顶端着丝粒染色体，呈杆状，Y染色体为“J”形；第二对、第三对染色体均为中央着丝粒染色体，呈“V”形；第四对染色体短小，为顶端着丝粒染色体，呈点状，附在染色盘边缘。由于唾腺染色体的假联会，X染色体的一端在异染中心上，另一端游离；而第二对、第三对染色体着丝粒在中央，可以从异染中心呈“V”字形向外伸展出四条臂（2L、2R、3L、3R），Y染色体着丝粒附近的异染色质参与了染色中心的形成，所以理想的片子，不管雌雄果蝇的唾腺细胞在显微镜下均可见五条长臂（X、2L、2R、3L、3R)和一条短臂（第四条染色体臂不易观察）。雄果蝇唾腺细胞中的X染色体臂比雌果蝇的稍细。在染色体臂上可观察到许多明暗相间的带。 (1)果蝇染色体有102个区，每个区又有A—F六个亚区，每个亚区又有1,2,3……等亚亚区。 (2)疏松区有许多灯刷状物质（灯刷染色体） (3)唾腺染色体的末端有不同的特征，可以借此来鉴别各条染色体。 特点 (1)巨大性（多线性）、伸展性； (2)体细胞联会，染色体只有半数； (3)各个染色体中异染色质多的着丝粒部分相互靠拢形成染色中心； (4)横纹有深浅、数目、疏密的不同，各自对应排列，这意味着基因的排列，具有种的特异性。若有缺失、易位、倒位、重复等现象，很容易在唾腺染色体上识别出来。 (5)唾腺染色体上的横纹宽窄、浓淡是一定的，但在果蝇的特定发育时期，它们会出现不连续的膨胀，这称为疏松区（puff节），目前人们认为这是这部分基因被激活的标志。 1