实验六人白细胞的鉴别.docVIP

上 海 师 范 大 学 实 验 报 告 专业、年级 08生物科学 班级 姓名________________学号_______________ 课程名称 免疫学 实验名称 人白细胞的鉴别 实验日期 目的 学习制作血液涂片制作和染色的方法，学会根据形态特点区分不同类型的白细胞。 原理 瑞氏染粉是由伊红和美蓝混合后组成的一种中性盐染料。将适量的瑞氏染粉用甲醇溶解后，即成为瑞氏染液。细胞的着色过程是染料透入被染物并存留其内部的一种过程，此过程既有物理的吸附作用，又有化学的亲和作用。各种细胞及细胞的各种成分由于其化学性质不同，对各种染料的亲和力也不一样，因此，在血涂片上可以见到不同的着色。细胞中碱性物质与酸性染料伊红结合染成红色，因此该物质又称为嗜酸性物质。如红细胞中的血红蛋白，嗜酸性粒细胞胞浆中的颗粒为碱性物质，这些物质可与伊红结合染成红色。细胞中的酸性物质可与染液中的碱性染料美蓝结合染成蓝色，该物质又称嗜碱性物质，如嗜碱性粒细胞中的颗粒为酸性物质可与碱性染料美蓝结合染成蓝色。细胞核主要由DNA和强碱性的组蛋白、精蛋白等形式的核蛋白组成，这种强碱性的物质与瑞氏染液中的酸性染料伊红结合成红色，但因为核蛋白中还有少量弱酸性物质，它们又与染料中的碱性染料美蓝作用染成蓝色，但因含量少，蓝色反应极弱，故核染色呈现紫红色。幼稚红细胞的胞浆和细胞核中的核仁中含有酸性物质，它们与染液中的碱性染料美蓝有亲和力，故被染成蓝色。当细胞含酸、碱性物质各半时，他们既与酸性染料作用，又与碱性染料作用，染成红蓝色或灰红色，即所谓多嗜性。当胞浆中的酸性物质消失时，只与染液中的伊红起作用，则染成红色，即所谓正色性。 器材与试剂 清洁载玻片、盖玻片、瑞氏染液、磷酸缓冲液（pH6.4~6.8）显微镜 步骤 取末梢血1滴，置载玻片一端，取另一边缘光滑的推片，防灾血滴前面慢慢后移，接触血滴后梢停。血液即沿推片散开，将推片与载篇保持30~45度角，向前平稳均匀推动推片，载篇上变留下一层薄血膜。血涂片制成后，立即在空气中挥动，使其迅速干燥，以免血细胞变形。 用蜡笔在血膜两头华线，以防染液溢出，然后将血膜平放在染色架上。 用瑞氏染液3~5滴覆盖整个血膜，固定细胞1分钟。 滴加等量或梢多的缓冲液，用吸球将其与染液吹匀，或者摇动玻片染色5~10分钟。 慢慢摇动玻片，然后用流动水从玻片的一侧冲去染液，待血片自然干燥后（或用吸纸吸干），即可镜检。 取染好色的血片，先用高倍镜观察全片，然后选择厚薄适宜，细胞分布均匀，染色效果好的地方仔细观察不同类型的白细胞，并将结果记录下来。