大孔吸附树脂分离纯化鸡血藤总黄酮的研究论文.docVIP

　　大孔吸附树脂分离纯化鸡血藤总黄酮的研究论文 王宏 何薇 曾祖平 唐勇 【摘要】 目的研究不同型号大孔吸附树脂对鸡血藤总黄酮的吸附解吸性能,为分离纯化鸡血藤总黄酮提供选择树脂的依据，选择最佳提取分离工艺。方法以鸡血藤总黄酮含量为指标,考察4种不同型号大孔树脂对鸡血藤总黄酮的比吸附量和比洗脱量。结果通过吸附容量和洗脱效果的比较，FL2和DS401型号树脂对鸡血藤总黄酮的吸附容量大,易洗脱。结论4种不同型号大孔树脂对鸡血藤总黄酮的吸附及解吸性能有很大差异,综合其比吸附量和比洗脱量。FL2和DS401型号树脂较适合分离纯化鸡血藤总黄酮。 【关键词】 鸡血藤； 总黄酮； 大孔吸附树脂 鸡血藤为传统中药，性温，味苦、甘，归肝肾经，有补血活血，通络的功效［1］.freela公司）；葛根素含量测定用（购于中国药品生物制品鉴定所)。 大孔树脂DS-401；FL-2；D1400(天津市海光化工有限责任公司)；FL-1(天津欧瑞生物科技有限公司)。 1.3 试剂 所用化学试剂均为分析纯 95%乙醇(AR)。 2 方法与结果 2.1 大孔吸附树脂预处理 各型树脂用 95%乙醇浸泡4 h后湿法上柱，95%乙醇流动清洗，并不时检查流出液，至流出乙醇液与水混合（1∶5）不呈白色混浊为止，然后用大量蒸馏水流动清洗，至无醇味备用。 2.2 标准溶液的制备 精密称取大豆苷元标准品5 mg 80%乙醇溶解，超声20 min,充分溶解后定容至25 ml，作为对照品溶液备用。 2.3 标准曲线的绘制精密吸取对照品溶液0.1，0.2，0.3，0.4，0.5，0.6，0.7 ml,分别置于7个10 ml干净容量瓶中，80%乙醇定容至10 ml,摇匀，紫外分光光度计278 nm处单波长测定，以吸收度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程，A=59.125C+0.010 86，r=0.999 8(线性范围0.002～0.014 mg/ml)。见图1。 图1 大豆苷元标准曲线图 2.4 供试液的制备 取鸡血藤500 g，2 500 ml 80%乙醇浸泡过夜,加热回流提取3次，2 h/次，合并提取液，减压回收乙醇至无醇味，加入5 000 ml蒸馏水，稀释至每毫升含生药0.1 g的溶液，静至过夜，过滤，滤液作为供试品备用。 2.5 总黄酮含量测定 采用紫外分光光度法，以大豆苷元为标准品，在278 nm处测定其吸光度，代入回归方程换算样品溶液的浓度，计算总黄酮含量。 2.6 树脂的筛选与解析 2.6.1 4种型号大孔吸附树脂对鸡血藤总黄酮的动态吸附性能考察各型号树脂比吸附量的测定 将预处理好的4种型号树脂适量（相当于5 g干树脂），分装到4个100 ml带塞具塞三角瓶中，精密加入供试液50 ml，室温下振摇吸附12 h。在0，1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12 h时吸取上清液，测定样品中总黄酮含量。按下式计算t小时内各树脂对鸡血藤总黄酮的比吸附量，以比吸附量对t作图，得到各树脂鸡血藤总黄酮吸附动力学曲线，见图2。 A=（C1吸附前-C2吸附后）×V1样/ =（C洗脱×V样品）/：比洗脱量（mg/g）；C：洗脱液浓度(mg/ml)；V:样品液体积（ml）； l 3个浓度样品液，精密量取50 ml,加入5 g FL-2型干树脂中静态吸附，每小时测定1次溶液中总黄酮的剩余量，计算出其比吸附量，结果见表1。 2.7.2 药液用量对大孔吸附树脂吸附鸡血藤总黄酮的影响分别精密量取生药浓度1 g/ml的药液20，50，70 ml，加入5 g FL-2型干树脂中静态吸附，每小时测定一次溶液中总黄酮的剩余量，计算出其比吸附量，结果见表1。 2.7.3 洗脱速度对大孔吸附树脂吸附鸡血藤总黄酮的影响分别精密量取3份药液浓度为1 g/ml的样品液50 ml于3个100 ml干净三角瓶中,加入5 g干树脂中，静态吸附6 h，充分吸附后用70%乙醇洗脱，收集洗脱液，按“2.6.2”项下测定计算洗脱液中鸡血藤总黄酮含量，结果见表1。 表1 生药浓度，药液用量，洗脱速度对大孔树脂吸附解析的影响 3 讨论 应用大孔树脂分离纯化鸡血藤总黄酮研究数据表明，4种树脂对鸡血藤总黄酮的吸附容量有明显差异，4种树脂中，FL-1型号树脂对鸡血藤总黄酮的吸附容量最大，D1400的吸附容量最小。DS-401，FL-2，FL-1 三种树脂6 h对鸡血藤总黄酮的比吸附量均超过12 mg/g,表明这3种树脂对鸡血藤总黄酮的吸附能力较强。同时，从图1还可以看出，这3种树脂对鸡血藤总黄酮吸附速度差异较大，FL-2型树脂在4 h时，率先达到饱和， DS-401，FL-1在5 h时相继达到饱和，D1400 12 h也未达到饱和（以12 mg/g为准）。因此，4种树脂对鸡血