应用自制组织芯片研究抑癌基因PTEN在口腔鳞癌中的表达论文.docVIP

　　应用自制组织芯片研究抑癌基因PTEN在口腔鳞癌中的表达论文 龚莉,周铁军,陈鲜, 陈伟妍,陈宣世 【摘要】 目的 从蛋白水平探讨口腔鳞癌组织中肿瘤抑制基因PTEN的表达及临床病理意义。方法 应用SP免疫组化染色法和组织芯片技术，检测10例正常口腔粘膜、10例口腔上皮单纯增生、15例口腔粘膜白斑及72例OSCC（其中高分化30例、中分化26例、低分化16例）组织中PTEN蛋白的表达，同时分析PTEN的表达与患者临床病理资料的关系。结果 PTEN基因在口腔鳞癌、口腔粘膜白斑、口腔上皮单纯增生和正常口腔粘膜组织中的阳性率分别为72.2％（52/72）、93.3％(14/15)、100％(10/10)和100％(10/10)，口腔鳞癌组与其他各组间有显著性差异（P 0.05）；PTEN的阳性表达率在不同性别、年龄和TNM分期等临床病理参数间无显著性差异（P 0.05），但与淋巴结转移、组织分化程度等临床病理参数间有显著性差异（P 0.05）。结论 PTEN基因表达的下调在OSCC的发生、发展中起着重要作用，其表达的异常可作为判断预后的参考指标之一。 【关键词】 PTEN；口腔鳞癌； 组织芯片； 免疫组化 Expression of Tumor Suppressor Gene PTEN in Oral Squamous Cell Cancer Using Tissue Microarray Techniques Abstract：Objective To explore expression of PTEN in oral squamous cell carcinoma (OSCC) and its clinicopathological significance.Methods PTEN protein expression in paraffin embedded tissues from 10 cases of normal oral mucosa, 10 cases of oral epithelial hyperplasia,15 cases of oral leukoplakia and 72 cases of OSCC munohistochemical method and tissue microarray techniques, meanal oral mucosa，there ong them（P 0.05）.PTEN expression etastases and degree of OSCC（P 0.05）.Conclusion Loss of PTEN protein expression may play an important role on the tumorigenesis and development of OSCC,.freelarker for judging prognosis of patients icroarray techniques; Immunohistochemical method 0 引言 口腔鳞癌(Oral squamous cell carcinoma, OSCC)是口腔颌面部最常见的恶性肿瘤，其发生的机制尚不清楚。癌基因和抑癌基因的突变及表达异常在肿瘤的形成过程中起着重要的作用。新近发现的抑癌基因PTEN是第一个具有磷酸酶活性的肿瘤抑制基因.freel连续切片。 1.2 试剂与方法 1.2.1 组织芯片的制备 采用手工制作芯片。（1）定位：由两位高年资病理医师进行筛选，找出肿瘤组织中具有代表性的区域，并在相应的石蜡块上做出标记。（2）微阵列蜡块的制作：先制作空白受体蜡块。采用包埋框方法制出直径为1.8mm，间距为2mm，横向编号为1～7，纵向为A～F，共42个小孔的空白受体蜡块。然后用一内径为1.7mm空针头依次在上述标记好的蜡块上钻取组织，依次放入空白受体蜡块中。将构建好的阵列蜡块放入模具中，再放入二次包埋仪中进行二次包埋制出微阵列蜡块。（3）切片，裱片：将制作好的组织微阵列蜡块重新切片，厚度为4μm。将切片裱于经多聚赖氨酸处理的载玻片上，制成组织芯片。共制作微阵列3个包含123个组织样本，有16个重复标本。 1.2.2 免疫组化染色 采用链霉素抗生物素蛋白－过氧化物霉连接法（SP法），即用型鼠抗人单克隆PTEN抗体、SP试剂盒、DAB显色剂均购至北京中杉公司。严格按试剂盒说明书方法染色，所有切片染色均在相同条件下进行。用PBS液代替一抗做阴性对照，用已知阳性前列腺组织切片做阳性对照。 1.3 结果判断 所有免疫组化染色结果均由两位病理医师在不知病例资料的情况下盲法阅片判断，对每张切片至少在高倍镜（×400）下观察10个不重复