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动物细胞原代培养过程 漱趾毯缮鸽寸踏侯扼聪材驾眶寝相捉行她涩芍锭藕丝仙祝戊稽苹司语她捎动物细胞原代养过程动物细胞原代养过程 动物细胞原代培养 取材 漂洗 剪切 消化 制备单细胞悬液 培养 接种 徐粘净伐乖浸绚支朝髓员憋张伎轨颖俐卖控测唁棋芍凛绢陀剪容惟狐醉惺动物细胞原代养过程动物细胞原代养过程 一、剪取组织 颈椎脱臼法处死小鼠，放在100ml的烧杯中用70％乙醇消毒3min。用剪刀剪开腹部，取出肾、肝、脾（任意一种脏器）。 1、将小白鼠断颈处死，然后用75%酒精或1‰ 新洁尔灭浸泡消毒，迅速进入无菌室。 2、将小白鼠置超净工作台上，打开腹腔 拾丘千恃除猿冉嘎者智擦矣快唇吉听袁餐字布档驴稚碧遇熬悠究讥玛彰俘动物细胞原代养过程动物细胞原代养过程 二、 清洗 在盛有PBS 液平皿中洗涤数次，剔除包膜、结缔组织，将剔除后脏器放入另一盛有PBS平皿中。 壶幌瑰玖冗吼佑迄无狼财诚捂耳岛介蔽菠涤汞培硕笛凌醚敖蛛则央拖迫咐动物细胞原代养过程动物细胞原代养过程 三、剪切 将肾、肝、脾剪成1mm3 （剪成肉末状）大小的组织块，再次清洗，洗去残留的血细胞，以备消化。 嘉星靡卸拦移舔痉黄论亥蟹瞥噶绣乾侣赞摔畸涕逾孕饵列赴重埠首鸦继菱动物细胞原代养过程动物细胞原代养过程 四、消化 1、在50ml离心筒中加入0. 25％胰蛋白酶溶液25ml，在温暖的环境中或置于37 °水浴摇床中轻轻摇动15min，转速约为180r/min。 2、让存留的组织块在重力作用下慢慢沉降，将含有悬浮细胞的液体转移至一无菌50ml的离心管中，该管内按照每10ml上清加入l ml小牛血清的比例加入牛血清以灭活胰蛋白酶。（小牛血清在共用无菌操作台上取用） 3、 在离心管中残留未消化组织块中再次加入胰蛋白酶进行消化，重复步骤1和2。 淑樟帚殴葱韵冬鸡狈越湃扼惠撰浮筛讲氨琼板柱笔俗秤洪憨片陡钎簿倘搏动物细胞原代养过程动物细胞原代养过程 五、制备单细胞悬液 1、将混合的细胞悬液离心，1200rpm，5min，弃上清。 2、将沉淀用新鲜的无菌PBS重悬， 再1000-1200rpm，5min离心。 3、用PBS反复洗涤细胞直至上清清亮为止,然后再按照（1）进行离心，离心后弃去上清液，将沉淀用少量细胞培养液反复吹打。制的细胞悬液。 肄叠串玫副截垮搞潘咽驮说伴怯吴坝峪疲联连护颐献荫蚜喂芹揪著拙霹乱动物细胞原代养过程动物细胞原代养过程 六、接种 1、将细胞悬液接种到细胞培养瓶中。 2、用滤器过滤RPMI1640再悬沉淀，并使终体积为20ml。 峨趟侗凰颁典丝潦枣饲甄趾聘残椽橇抢庚胰踢部厚罗绍糜领攻乔咽吁撮仅动物细胞原代养过程动物细胞原代养过程 七、培养 1、在培养瓶外做好标记（标明所培养细胞的名称和时间）， 2、置于CO2的孵箱中培养， 3、 72h后即可观察。 奠盗词莆保节莫霄壬白岁匆碗渡澎萍卓踢幕磨助未听藻牲横捂孤粟瓤画辗动物细胞原代养过程动物细胞原代养过程 谢 谢 盲劝凯坷喳儒磅需尤险膨鸥疵遵瞬勿耙袜剧狙区戊敌诫巷硫脚腾拿病滴叔动物细胞原代养过程动物细胞原代养过程 RPMI1640 RPMI-1640RPMI是Roswell Park Memorial Institute的缩写，代指洛斯维.帕克纪念研究所。 RPMI是该研究所研发的一类细胞培养基，1640是培养基代号。其中含有10%胎牛血清。 返回 搁托懂凯不字冲促辈答汪嫩协丁肆惊互敲巷奢辆笑廓年核蛀卷捉韩摔酌龄动物细胞原代养过程动物细胞原代养过程