脂肪酶生物催化与生物氧化进展.pptVIP

脂肪酶生物催化与生物转化最新进展; 脂肪酶是一种重要的水解酶，已有一百多年的研究历史。在20世纪70年代人们把催化长链脂肪酸酯水解或油酸酯类水解的酶类定义为脂肪酶。 由于该定义容易引起脂肪酶和酯酶的混淆，后来将脂肪酶的定义修改为催化油脂水解的一类酶的总称。 由于脂肪酶的天然底物为难溶于水的长链脂肪酸酯，所以脂肪酶常作为油－水界面不容酯类的水解酶。;1. 脂肪酶的来源与获得;　　 微生物目前是脂肪酶的重要来源，产脂肪酶菌株主要集中在根霉、曲霉、假丝酵母、青霉、毛霉、须霉假单胞菌等。微生物脂肪酶由于种类多、作用ｐＨ较动植物脂肪酶广、温度范围广、对底物的专一性强、便于生产和获得高纯度制剂等优点，目前已得到广泛应用。另外，由于脂肪酶易变异，可定向筛选良种、生长繁殖快、产酶周期短、发酵产物单纯，故微生物脂肪酶的研究成为当前脂肪酶研究领域的主流。;　　 迄今，实现商业化的主要是微生物酶，生产商主要包括丹麦的Novo-Nordisk,荷兰的Genencor international B.V.，德国的Boehringer-Mannheim和日本的Amano Co.，供应商主要是Sigma Chemical Co.和Fluka Chemie AG。 表1-1列出了部分实验室产用的脂肪酶。;;1.2 微生物脂肪酶的种类 据统计，细菌有28个属、放线菌有4个属、酵母菌有10个属、其它真菌有23个属，共计达65个属的微生物产脂肪酶。但实际上，脂肪酶在微生物界的分布远超过这个数目，从脂肪酶的作用来看，更多的微生物中应该有脂肪酶的合成，只是量多少的问题。 微生物脂肪酶的种类分为细菌脂肪酶与真菌脂肪酶。; 细菌脂肪酶在发规模商业化生产中扮演者重要角色。细菌脂肪酶大多数是胞外酶易于液体深层发酵，生产比较容易。细菌脂肪酶大多数是碱性脂肪酶，且在pH4-11、温度30℃-60℃具有良好的稳定性。 目前一些数细菌的野生菌或重组菌株得到了商业开发, 其中最重要的是无色杆菌(Achromobacter) 、产碱杆菌(Alcaligenes) 、节细菌属( Arthrobacter) 芽胞杆菌( Bacillus) 、伯克霍尔德菌(Burkholderia) 、色杆菌(Chromobacterium)和假单胞菌属( Pseudomonas) , 尤其是假单胞菌属的细菌脂肪酶应用最为广泛; 直到1950 年才开始进行真菌脂肪酶的研究。由于真菌脂肪酶具有温度和pH 稳定性、底物特异性以及在有机溶剂中具有高活性, 且提取成本比较低等优点, 因而发展迅速。 目前商业化的真菌脂肪酶主要有: 黑曲霉( Aspergillus niger) , 米曲霉( Thermomyces Lanuginosus) , 高温毛壳霉( Humicolalanuginosa) , 米赫毛霉(Mucor miehei) , 少根根霉( Rhizopus arrhizus) , 德氏根霉( Rhizopus delemar) ,日本根霉( Rhizopus japonicus) , 雪白根霉( Rhizopusniveus) , 米根霉( Rhizopus oryzae) 等。;1.3脂肪酶生产 脂肪酶的制备方法有提取法、化学合成法和微生物发酵法。提取法资源有限、工艺复杂、产量低; 化学合成法成本太高; 微生物发酵法的应用前景要远远大于提取法和化学合成法。它不受环境影响, 资源丰富,产酶周期短, 产物较单纯且成本低, 生产上易于管理。 ; 商品化脂肪酶主要来源于各种细菌、酵母和真菌等微生物的发酵, 有些霉菌可通过固态发酵及液体深层发酵两种方法进行发酵。由于提取材料来源和酶含量的因素, 动植物脂肪酶主要应用于科学研究。; 由于脂肪酶产生菌的种类及酶的特性不一，其培养基的配比和培养条件也各不相同。多数实验表明，添加脂类到培养基中能够引起脂肪酶产量的明显增加。另外，在培养基中含有单糖、双糖和甘油，会抑制脂肪酶的生产。 同时，微量元素和有些添加物对发酵产酶也有显著影响。; 有报道称，无机离子如K+,Na+,Mg2+,Ca2+等对脂肪酶生产有促进作用，而Mn2+,Ba2+,Zn2+,Fe2+,Co2+,Cu2+等则抑制脂肪酶产生，非离子表面活性剂如Tween，Span及糖脂能刺激胞外酶的产生，而咪唑则抑制产酶。;2.脂肪酶催化的反应; 右图2-1为脂肪酶催化酯类水解的简单过程。;脂肪酶可催化的反应如下： 酯的水解 RCOOR`+H2O