应用DPO引物检测马铃薯病毒的多重RT—PCR技术研究.pdfVIP

植物病理学报 ACTAPHYTOPATHOLOGICASINICA 39(4)：431434(2009) 应用 DPO引物检测马铃薯病毒的 多重 RT—PCR技术研究 刘 梅 ，黄 新 ，马 占鸿 ，陈洪俊 ，李明福 (中国农业大学农学与生物技术学院，北京 100193；中国检验检疫科学研究院，100029) Multiplex RT-P·CRfordetectionofpotatovirusesw ithadualpriming oligonucleoti-- de(DPO)system LIUMei ，HUANGXin，MAZhan．hong，CHENHongqun，LIMing．fu (CollegeofAgricultureandBiotechnology，ChinaAgriculturalUniversity，Beijing100193，China；ChineseAcademyofIns— pectionandQuarantine，Beijing100029，China) Abstract：DPO isoneofthenew specificprimersforvirusdetection．Inthisstudy，fivesetsofdualpriming oligonucleotide(DPO)primersofrPotatovirusX (PVX)，PotatovirusY(PVY)，PotatovirusV(PVV)， Tobaccoringspotviurs(TRSV)andCucumbermosaicviurs(CMV)weredesignednadappliedtohtedetec— tionofhtemainpotatoviruseswihtmultiplexreversetranscriptionpolymerasechainreaction(m—RT—PCR)， includingtwoquarantinevirusesinChina(PVVandTRSV)．TheresultsshowedhtatDPO—m—RT—PCRexhi- bitedhighPCR specificityandsensitivityevenunderlessthanoptimalPCR conditioncomparedwiht conven— tionalm—RT-PCR．DPO—m—RT—PCRcouldbeappliedinhtehealhtyevaluationofseedpotatonaditsexit—entry quraantine． Keywords：dualprimingoligonucleotide(DPO)primers；multiplexRT—PCR；poattoviruses 文章编号：0412-0914(2009)04-0431-04 田间条件下，马铃薯种苗经常受到多种病毒的 重制约多重 PCR技术的应用。近年来，一种新兴 复合侵染。目前，已报道可侵染马铃薯的病毒超过 的DPO(dualprimingoligonucleotide)技术，既可保 25种。其 中最常见且危害严重的有马铃薯Y病毒 证扩增的特异性，又可大大提高扩增效率，为多重 (PVY)和马铃薯 x病毒 (PVX)。黄瓜花叶病毒 PCR技术的应用提供 了新的前景 J。针对上述 5 (CMV)为害广泛 ，在种薯贸易中属于限定 的非检 种病毒，本研究采用DPO技术，建立多重 RT—PCR 疫性有害生物。烟草环斑病毒 (TRSV)和马铃薯 快速检测体系，可为马铃薯检验检疫和种薯健康评 V病毒(PVV)是侵染马铃薯的2种具有检疫意义 测提供有效手段 。 的病毒。建立快速、准确的病毒检测技术对保障种 1 材料与方法 薯质量和防止检疫性病毒扩散 ，具有重要现实意义。 1．1 材料 多重RT—PCR可以同时检测多种病毒，降低检 验成本，提高检验效率 。传统的多重 PCR体 试验所用