酯酶同功酶电泳技术检测杂交玉米种子纯度应注意的问题.pdfVIP

寸圈种业 种子检验与加T 酯酶同功酶电泳技术检测杂交玉米 种子纯度应注意的问题 王丽梅 李秀云 阮建华 (北京市密云县种子执法监督站，101500) 纯度是种子的重要质量指标．也是种子分级的主 用单粒粉碎器粉碎后 ．装人 1．5ml的离心管中．每管加 要依据 ．利用同功酶电泳法检测杂交玉米种子纯度，其 入粉碎样品体积 1～2倍 的样 品提取液 ．震荡、充分摇 稳定性和重演性好 室内同功酶电泳技术检测杂交玉 匀后 ．立即放人 1～4~C冰箱中浸提 2h．然后用 10000～ 米种子纯度 ．在室温的控制 、药液 的配置 、样 品的制备 15000r／min高速台式离一12,机离心 2min备用 样品制备 等各个技术环节都应该做到准确无误 ，本文通过近 3 时应注意以下几点 年来的工作实践谈谈同功酶电泳技术几点注意事项 2．1 样品必须具有代表性 样品应从净度分析后 的 1 药液的制备和保存 种子样品中随机数取 ．不能随意抓取进行鉴定 ，这样会 1．1 酸度计的使用 酸度计在使用前应进 行校准 ． 影响鉴定结果的准确性 校准使用的标准缓冲溶液必须准确配置 ，配置好缓 2．2 防止样品子粒间交叉污染 使用单粒粉碎器 每 冲液应密封存放且避光保存在 5℃的环境温度下 ．最 粉碎完一粒样品．要彻底清理干净 ．再粉碎下一子粒 ， 长保存时间为 2个月 酸度计必须 l周校准 1次或 且粉碎程度要一致 在使用前进行校准 根据 电泳缓冲溶液的酸碱度来 2．3 提取液加入要适量 提取液不宜加入过多．一般 选择标准缓冲溶液进行校准 ．并且待测溶液温度一 加入样品提取液的 1～2倍摇匀．才能充分有效地提取 定与标准缓冲溶液 的DH值及温度对照表相一致 ，否 蛋白质 。 则 ．配置的电泳后缓冲溶液的酸碱度不准确 ．从而影 2．4 样 品提取液低温保存 离心后 的样 品提取液 响凝胶效果 不宜在常温下放置时间过长 ．应及时进行加样电泳 ． 1．2 溶液的配制 凝胶溶液 称取 150g丙烯酰胺和 若重复利用 ．应将其放置于冰箱冰冻保存 ，以保证酶 4g甲又丙烯酰胺溶于500ml的蒸馏水中，冬季温度低 活性 。 难溶时，可进行加热溶解 ；称取 l5．5g三羟 甲基氨基 甲 3 玻璃板的选择和清洁 烷溶于 1000ml蒸馏水中．也可按 比例多配备用 ．并用 玻璃板是用来制作胶室的器具 ．选用的玻璃板要 柠檬酸准确分别调制 pH值为 8．9和 pH值为 6．8各 平整规范 在使用过程中必须清洗干净，如果上次使用 500ml；称取 0．5g过硫酸铵溶于50ml的蒸馏水 中；称取 过的清洗不净 ．那么下次再用时会影响凝胶和电泳分 1．247g乙二胺四乙酸二钠 ．溶于 100ml蒸馏水中 样品 离效果．冈此必须用去油剂和洗衣粉反复刷洗玻璃板， 提取液 称取 12．114g 羟 甲基氨基 甲烷溶于 1000ml 再用去离子水把玻璃板冲洗干净 ．立于玻璃板支架上， 蒸馏水中，用盐酸调 pH值为7．5。电泳液 称取 6．2g 防止灰尘污染 ．烘干或 自然晾干 羟 甲基氨基 甲烷和2g的甘氨酸定溶至 1000ml，用时需 4 胶室的制作 稀释 l0倍 染色液 染色液可现用现配 把 凹玻璃板平放在试验台上 ．用 10ml玻璃注射器 以上4种缓冲溶液配制时．必须注意小心并准确 沿玻璃板三边 3-5mm处 ．有 凹口的一边除外 ．均匀地 称取后 ．置于洗净烘干的烧杯中．盛于棕色烧杯放于