甜瓜蔗糖磷酸合成酶基因全克隆及工程载体的构建.pdfVIP

维普资讯 果 树 学 报 2008，25(4)：548～551 Joum alofFruitScience 甜瓜蔗糖磷酸合成酶基因全克隆 及工程载体的构建 侯丽霞 ，何启伟 ，赵双宜2，焦 自高 ，王崇启 ，董玉梅 (山东省农业科学院蔬菜研究所 ， 山东大学生命科学院，济南 250100) 摘 要：蔗糖磷酸合成酶在甜瓜果实蔗糖合成途径中起关键性的调节作用 ，克隆该基因并导入甜瓜低糖 自交系，可 改 良甜瓜果实品质创新优 良种质。从甜瓜幼苗叶片提取总 RNA，利用 RT—PCR与 Southernblot方法相结合 ，重组子 质粒经限制性 内切酶酶切和 PCR验证以及测序 同源性 比较 ，克隆到基 因的5’(2859bp)和3’(852bp)。应用高保真 聚合酶 PCR拼接蔗糖磷酸合成酶完整 cDNA序列 3692bp，该片段与 GenBank中其它植物基 因序列具有 97％～ 99％的同源性，登录号DQ364058。应用BamHI、 nI、BJⅡ限制性酶切获得植物双元表达载体 pROK及基因的 线性片段，通过 -r4连接酶反应 ，构建了以CaMV35S为启动子，以Tnos为终止子的工程载体 pROK—SPS，该载体含有 A 一II选择标记基 因 关键词：甜瓜：蔗糖磷酸合成酶；基因克隆；工程载体 中图分类号：$652 文献标识码：A 文章编号：1009—9980(2008)04—548—04 Genecloningofmelon sucrosephosphate synthaseand construction of plantengineeringvector HOULi—xia，HEQi—wei，ZHAOShuang—yi2JIAOZi-gao，WANGChong-qi，DONGYu—mei (WegetableResearchInstitute，ShandongAc~emyofAgriculturalSciences，。CollegeofBiologicalScience，ShandongUniversity，Jinan， Shandong250100China) Abstract：Sucrose—phosphatesynthaseisthecriticalsynthaseofsucrosesyntheticrouteinmelonfruitsTheaim ofthisex— ． perimentistocloneitandintroduceintolow carbohydratesmelonself—bredlineforcreatingnewandgoodspeciesofhigh qualityfruit．BymeansofRT—PCRandSouthernblotmethods wehaveclonedthe5’end2859bpand3’end852bpflag— ， mentsofmelonsucrose—phosphatesynthasegenerfom thetotalRNAinseedlingleaves．Recombinantplasmidswereidenti— fledthroughdigestedby restrictionenzyme，PCR andcompared sequences homolo