马铃薯X病毒运动蛋白基因的原核表达、抗血清制备及应用.pdfVIP

维普资讯 第35卷 第4期 植 物 保 护 学 报 V01．35 No．4 2008年 8 月 ACTA PHYTOPHYLACICA SINICA Aug． 2008 马铃薯 X病毒运动蛋白基因的原核表达、 抗血清制备及应用 刘秀君 张献军 刘兰伟 孙燕霞 刘红梅 (山东农业大学生命科学学院，泰安 271018) 摘要：构建马铃薯x病毒运动蛋 白(P25)原核表达载体，并在大肠杆菌BL21(DE3)pLysS中诱导 表达融合蛋 白，所表达的P25蛋 白经SDS—PAGE电泳纯化后免疫小鼠，抗血清效价为 1：4000，抗血 清与PVX有特异性反应(P／N2)，且具有较强的反应特异性，而与PVY、TMV均不发生反应。该 方法制备的抗血清可用于ELISA检测 PVX感病植株及Westernblot检测转基因植株。 关键词：马铃薯x病毒；运动蛋白；原核表达；抗血清；转基因烟草 Expressionofmovementprotein geneandantiserum preparationofPotatovirusX LiuXiujun ZhangXianjun LiuLanwei SunYanxia LiuHongmei (CollegeofLifeSciences，ShandongAgriculturalUniversity，Tai’an 271018，ShandongProvince，China) Abstract：RecombinantplasmidpET—P25wasconstructedbyligatingmovementprotein(P25)geneof PotatovirusX (PVX)intotheexpressionvectorpET一30aandthentransferredintoE．coliBE21(DE3) pLysS．TheresultsofSDS—PAGE showedthat29kD specificfusionproteinwasproducedafterinduction byIPTG．Thefusionproteinwasinjectedintomicetoprepareantiserum afterbeingpurifiedcurdely． Andthetiterwasdeterminedtobe1：4000．TheantiseurmhasspecialresponsewithPVX (P／N2) comparedwithnoresponsewithPVY andTMV，Usingthisantiseurm，wecanexaminetheinfectedlear— esbyPVX andPVX—P25transgenictobacco．Andtheresultshowed thatP25genehadbeenexpressed andtranslatedtoproteininsometransgenicplants． Keywords：Potatovir~sX ；movementprotein；prokaryoticexpression；antiseurm ；transgenictobacco 马铃薯在我国农业生产中占有重要地位。长期 病毒外壳蛋白或融合蛋白作为抗原制备高特异性的 以来，马铃薯的产量和质量受到病毒病的严重威胁 ， 抗血清。此方法已在某些植物病毒抗血清制备中得 导致种性退化、大幅减产_1J。马铃薯 x病毒 (Potato 到较广泛应用 I4，但利用病毒编码其它蛋 白制备 virusX，PVX)分布广泛，虽然其引起的症状较温和， 血清的研究较少。本研究将 PVX编码的运动蛋 白 但 田间常与其它病毒混合侵染，导致毁灭性