细胞通透性的改变与其应用.pdfVIP

4l卷3期 微 生 物 学 报 Vnl．4 No3 20()1年6月 Ad4 sinkn 』叩e 200l M跏艟ok鲁证n 细胞通透性的改变及其应用” 罗 杰 (华中科技大学牛向科学与技术学院 武汉4姗4) CELLPERMEABILlZEDANDIT’SAPPLICATIoN“ LuoJio 430074，如眦 如拼F，咖s…DndTkbn0{0∥，Hn船^。喇o㈣lh盯＆…em以啊“∞如盯，胁hR 关键词：细咆通透l生，酶话测定，酶，蛋白质提取．产物分泌，生物转化 97 文献标识码：B 文章编号：000I一6209f200¨03一0386-04 中田分类号：0939 本文综述丁细胞通透性的改变厦在胞内酶测定、胞内酶，蛋白质提取、细胞代蹴产物分泌及生物转 化等方面的应用。 1 细胞通透性的改变 为r克服由于细胞壁、细胞膜存在而形成的渗透壁障，人们通过物理、化学等方法改变细胞壁、膜的 通透性。通过以上处理，渗漏细胞通静仍保持其形态上的完整眭．但由于其细胞壁、膜受到了一定的破 坏，其对低分子量物质的渗透障碍被部分或完全解陈。 细胞通透性改娈因不同的微生物类型而有所不同，即使对于同类捌的微生物，也会由于细胞壁、膜 的组成和结构不同而有很大差别。另外近胡对地n口w缸z驴of”池和跖r。如印。rⅡ如阽Ⅲe吐i德尔布有孢酵母 的研究表明，细胞通透性的改变随菌龄不同，蹙化不大…。改变细胞通透性的方法很多，如超声、冻融、有机 x．100等)和螫台剂(如EDTA)处理等。 溶剂(甲苯、_二甲亚砜等)、击污剂(如cTAB、R种n一80晡loll 2 应用 2．1用于胞内酶活力的测定 对于胞内酶的测定，以往常采用机械法进行细胞破碎后测定提取液中的酶活力，不但繁琐费时，结 中醇脱氢酶活力的影响。Gowda等”‘用毛地黄苷处理尉叫晰，。删加g“如，分别测定其胞内醇脱氢酶 (^DH)、B一葡萄糖苷酶、己糖激酶等酶括力．结果明显高于用匀浆、超声、甲苯自溶及用磷酸钾缓冲液提取 等方法。Blankens忙i11等”1用非离子型去污利T^“Jnx．100结合毛地黄苷处理如蒯讯6。i西谢，并在此基础 酵母刊如缸pm珊，细胞干重盈蛋白质分疑均下降，但所测酶活力高于细胞破碎后所删的结果。另外，用 有机溶剂处理后的渗漏细胞也被用来毂f定胞内半乳耱苷酶和细胞色素c氧化酶活力。 2．2用于胞内酶，蛋白质的提取 绝大多数的重组蛋白质／酶位于胞内，目前工业上多采用机械法(高压匀浆和球磨法等)将细胞破碎 。国家九五科技攻关重点资助项目(96．c02．03_0 作者简介：罗杰(J97I一)，男，29岁．讲师。 收稿日期：2000．04一18．修回日期：200mlo—08 万方数据 3期 罗 杰：细胞通透性的改变及其应用 387 后提取，存在着如F缺点：破碎后细胞碎片过多；胞内棱酸物质的释放使提取液牯度大大增加；几乎释散 r所有胞内可溶性蛋白质．使杂蛋白质含量过大。近年来．化学通遘法提取胞内蛋白质，酶出其陕速、简 便、选择胜强等特点逐渐受到人们的重视， MawlIj等对运用EDTA和热冲击处理￡．∞血提取用质酶(penpl 地比较f化学渗橱法，冻融法、超声往对Eco“青霉素酰化酶的提取效率的影响，超声法提取总蛋白含 量最高，但纯化系数极低。溶菌酶加EDTA处理后酶活力最高，但纯化系数仍不高。室温r以胍加FD． TA处理后酶活力保留80％，杂蛋白含量侵低．纯化系数钺高。 TA(O．3mm枷L)和脲(6 于古有重组蛋白的F．o诫细胞的化学通透研究正在进行中。NaRI“等“在实际发酵条件下对F…“生 和胞内蛋白释放