第四组-液相色法测定对位红.ppt

液相色谱法测定对位红 第四组：李阳 吴凯 王雨婷 葛钰蓉 * * 目前对于食品中的对位红测定方法主要采用薄层色谱法·“液相色谱分析法”列和液相色谱／质谱分析法等，其中法定检测方法包括欧盟委员会规定的辣椒粉中苏丹红测定的高效液相色谱法测定和我国质检总局颁布的《食品中苏丹红染料的检测方法——高效液相色谱法》(GB／T19681—2005)，但这两类标准检测方法中存在一定的技术缺陷，如样品本底干扰定性结论、固体萃取柱的活性难于控制、均未涉及对“对位红”的检测方法建立、对检测的干扰等。本方案针对标准实施过程中可能出现的复杂问题，探讨了在提取、分析方面的条件优化，使液相色谱质谱联用仪能满足日常的检测工作的需要。 一、对位红的简介 对位红亦称对硝苯胺红，常温下呈固态，密度 1.50g/cm3,熔点248-252℃。是一种常用的红色 颜料，属于重氮系列化工合成染色剂，主要应用 于机油，蜡，油彩，汽油等工业产品。 对位红的熔点即已达到250 ℃，明显不能采用气 相色谱法来进行检验，因为样品很难汽化。所以 我们采用液相色谱法来对其进行检测。 物化性质 1、物理性质：　　 对位红亦称对硝苯胺红，常温下呈固态，密度1.50g/cm3,熔点248-252℃。是一种常用的红色颜料，属于重氮系列化工合成染色剂，主要应用于机油，蜡，油彩，汽油等工业产品。 2.化学性质 它和引发英国有史以来最大一起食品召回行动的“苏丹红”染料相似，都是工业上使用的化学物质，都被禁止在食品染色剂中使用。据牛津大学物理与理论化学实验室的化学品安全信息介绍，“对位红”对眼睛、皮肤和呼吸系统有刺激性，但其毒性尚在研究中，没有明确的结论。 二、对位红检测及标准 检测方法 一、液相色谱法 1.高效液相色谱法 2.凝胶净化液相色谱法 3.反相高效液相色潽法 二、分光光度法--紫外可见分光光度计 二、检测方法 1、1 高效液相色谱法 实验室操作方案 仪器：天美液相色谱仪、超声清洗器、无油真空泵及溶剂过滤装置、滤膜过滤器、平头微量进样器 试剂：乙腈（色谱纯）、冰醋酸。 色谱条件： 色谱柱选用C18柱（柱长15cm）；柱温： 30℃；进样量： 20 L；样品运行时间： 15 min； VWD 波长选用485 nm，作为对位红的检测波长；流动相为乙腈:水/ 90:10，不需要缓冲 步骤： （1）取乙腈400ml，用0.45um的有机滤膜过滤后置于原瓶。取16ml冰醋酸溶于100ml蒸馏水中，用0.45um的水相滤膜过滤后置于乙腈瓶中，贴上标签。超声波清洗器脱气15min。将配置好的流动相置于色谱仪旁的篮筐内，放入流动相吸液管。 （2）准确称取1-（4-硝基苯基偶氮）-2-萘酚10mg，用经过滤及脱气后的乙腈定容至100ml，作为标准贮备液，浓度为100ug/ml。分别吸取该储备液0.10、0.20、0.40、0.80、1.00ml置于100ml容量瓶中，用乙腈定容至刻度，即配成对位红浓度分别为0.10、0.20、0.40、0.80、1.00ug/ml的标准溶液 （3）准确称取对位红样品10.0mg，用经过滤及脱气后的乙腈定容至100ml，从中取1ml再用乙腈稀释至100ml。 （4）打开液相色谱仪电源开关，开高压输液泵开关。设定流动相A通道流量为100%，设流动相流速为1ml/min。 （5）启动泵开关，打开紫外检测器电源开关。设定检测波长为480nm （6）打开液相色谱工作站，选择通道。 （7）观察基线状态，当基线走直后，即可进样。 （8）开始进样：平头微量注射器用乙腈清洗5次，废液排到滤纸上。将进样阀柄置于“load”位置。 （9）在注射器中吸入标样或试样60ul，注入进样口，重复3次，此时对定量管进行了清洗。 （10）吸入标样60ul。将标样注入进样口，顺时针旋动进样阀至“inject”位置。此时工作站开始自动计时。 （11）数据采集：从计算机显示屏上可以看到样品的流出过程和分离状况，待所有的色谱峰流出完毕后，按“stop“键停止分析。记录保留时间及色谱峰面积。 （12）结束工作：所有样品分析完毕后，让流动相继续流动10~20min。关闭色谱工作站、关闭检测器电源、关闭液相色谱仪电源开关。 数据处理： （1）绘制工作曲线：以对位红标准溶液的浓度为横坐标，色谱峰面积为纵坐标，绘制工作曲线 （2）从曲线上直接查的未知试样对应的质量分数。 数据处理： 保留时间：4.521 峰高：210123 峰面积：221456 1.2凝胶净化液相色谱法 优点：操作简单，填充完凝胶柱后可重复使用，实际用量少于欧盟及国标方法，并且用淋洗液替代剧毒而又昂贵的乙腈进行提取，自制凝胶柱净化富集避免了欧盟方法用乙腈直接萃取进样