现代生物技术思考题医.docVIP

基因工程：又称基因克隆、DNA重组、 DNA克隆、分子克隆 1.概念：应用酶学的方法，在体外将目的基因与载体DNA结合成一具有自我复制能力的DNA分子（复制子、重组体），继而通过转化或转染宿主细胞、筛选出含有目的基因的转化子细胞，再进行扩增、提取获得大量同一DNA分子拷贝，或其表达产物。 2.基因操作的四大要素 1、DNA重组技术：把不同来源的DNA片段切割、连接的方法； 2、载体克隆或表达技术：具有自我复制能力的适宜的载体，便于外源DNA片段的整合； 3、转化技术：把重组DNA导入细菌、酵母、植物或哺乳动物细胞的方法； 4、选择技术： 从细胞大群体中筛选出已经获得重组DNA片段的细胞的程序； 3.主要内容：分（离目的基因）、切（割目的基因和载体）、接（连目的基因和载体）、转（化宿主细胞）、筛（选阳性克隆）和表（达目的基因） 4.常用的工具酶： 限制性核酸内切酶 切割DNA DNA连接酶 生成3′- 5′磷酸二酯键 DNA聚合酶Ⅰ 探针标记、补平3′末端 反转录酶 cDNA合成 多聚核苷酸激酶 5′磷酸化、探针标记 末端转移酶 3′末端多聚尾 碱性磷酸酶 切除末端磷酸基 基因工程工具酶――限制酶、连接酶 一、限制酶 Restriction endonucleases ㈠ 生物体的限制-修饰系统 DNA Restriction-Modification Syst