培养基母液的制备—培训课件.ppt

接种后培养基出现大面积污染、菌落分布不匀,此种情况主要是接种过程中发生的污染所致。可能是接种室不洁净、菌类孢子过多、镊子带菌、操作人员手未彻底消毒、操作人员呼吸及超净工作台出现故障等原因引起。避免此现象发生的方法是:保持无菌接种室洁净，并定期用甲醛等熏蒸灭菌；在接种前无菌室用紫外灯灭菌时间不低于20-30 min；用75%酒精喷雾杀菌降尘，超净台开启15-20 min后方可使用；镊子等接种工具严格彻底灭菌，且接种时使用1次灭菌1次；操作过程中经常用75%酒精等消毒剂擦洗手部等措施。 接种日期 接种数 污染数 污染率 主要污染菌种 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 注： 污染率（%）=（污染的外植体数/总接种外植体数）×100％ 五、思考题1.接种过程中，通过哪些措施来防止细菌对接种工具，接种材料的污染 2、接种后污染调查,观察接种后７天的污染情况，填入下表：　观察日期 二、实验器材 电光分析天平（感量为0.0001g）、扭力天平（感量为0.01g）、台秤（感量0.5g）、烧杯（500ml、100ml、50ml）、容量瓶（1000ml、100 ml、50 ml、25 ml）、细口瓶（1000 ml、100 ml、50 ml、25 ml）、药勺、玻璃棒、电炉。 三、实验药品 NH4NO3、?KNO3?、CaCl2·2H2O?、?MgSO4·7H2O、KH2PO4?、?KI?、 H3BO3?、 MnSO4·4H2O、 ZnSO4·7H2O、 Na2MoO4·2H2O?、CuSO4·5H2O?、CoCl2·6H2O?、FeSO4·7H2O、Na2-EDTA·2H2O?、肌醇 、烟酸?、?盐酸吡哆醇(维生素B6)??、盐酸硫胺素(维生素B1)?、甘氨酸?。 四、实验步骤 1、大量元素母液的配制 各成分按照培养基成分表浓度含量扩大10倍，用感量为0.01g的扭力天平称取，用蒸馏水分别溶解，按顺序逐步混合。后用蒸馏水定容到1000ml的容量瓶中，即为10倍的大量元素母液。倒入细口瓶，贴好标签保存于冰箱中。配制培养基时，每配1L培养基取此液100ml。 表1 MS培养基大量元素母液制备 序号 药品名称 培养基浓度（mg/L） 扩大10称量(mg) ? 1 NH4NO3 1650 16500 蒸 馏 水 定 容 至 1000 ml 2 KNO3 1900 19000 3 MgSO4·7H2O 370 3700 4 KH2PO4 170 1700 5 CaCl2·2H2O? 440 4400 注意： (1) 配制大量元素母液时，某些无机成分如Ca2+、SO42一、Mg 2十和H2PO4一等在一起可能发生化学反应，产生沉淀物。为避免此现象发生，母液配制时要用纯度高的重蒸馏水溶解，药品采用等级较高的分析纯，各种化学药品必须先以少量重蒸馏水使其充分溶解后才能混合，混合时应注意先后顺序。特别应将Ca2+、SO42一、Mg 2十和H2PO4一等离子错开混合，速度宜慢，边搅拌边混合。 (2)CaCl2·2H2O要在最后单独加入，在溶解CaCl2·2H2O时，蒸馏水需加热沸腾，除去水中的CO2，以防沉淀。另外，CaCl2·2H2O放入沸水中易沸腾，操作时要防止其溢出。 ２、微量元素母液的配制 MS培养基的微量元素无机盐由7种化合物（除Fe ）组成。微量元素用量较少，特别是?CuSO4·5H2O、?CoCl2·6H2O?，因此在配制中分微量Ⅰ、Ⅱ配制。按照表2，表3配方，用感量为0.0001g的电光分析天平称量，其它同大量元素。配制培养基时，每配制1L培养基，取微量Ⅰ10ml，微量Ⅱ１ml 表2 MS培养基微量Ⅰ的配制 序号 化合物名称 培养基浓度（mg/L） 扩大100倍称量(mg) 1 MnSO4·4H2O 22.3 2230 2 ZnSO4·7H2O 8.6 860 3 H3BO3 6.2 620 4 KI 0.83 83 5 CuSO4·5H2O? 0.025 2.5 6 CoCl2·6H2O?? 0.025 2.5 7 Na2MoO4·2H2O 025 25 3、铁盐母液的配制 铁盐不是都需要单独配成母液，如柠檬酸铁，只需和大量元素一起配成母液即可。目前常用的铁盐是硫酸亚铁和乙二胺四乙酸二钠的螯合物，必须单独配成母液。这种螯合物使用起来方便，又比较稳定，不易发生沉淀。配制方法同上，直接用蒸馏水加热搅拌溶解。配制培养基时，配制1L取此液10ml。 序号 化合物名称 培养基浓度（mg/L） 扩大100倍称量(mg) 1 Na2-EDTA? 37.3 3730 2 FeSO4·7H2O 27.8 2780 表4 MS铁盐母液的配制 注意： 在配制铁盐时，如果加热搅拌时间过短，会造成