医学科研基础酶学2011.9—培训课件.pptVIP

* 同工异源酶：来源不同，但能识别和切割同一位点 同源粘性末端：用同一种限制酶切割的异源DNA片段产生相同的粘性末端 同尾酶：有些限制性内切酶识别序列不同，但酶切后可以产生相同的粘性末端 BamH I G GATCC Bgl I A GATCT * 常用限制性核酸内切酶的特性 微生物名称 酶名称 识别顺序 同工异源酶 同尾酶 Bacillus amyloliquefaciens H 解淀粉芽孢杆菌 BamHⅠ GGATCC BstⅠ Bgl Ⅱ MboⅠ Bacillius globigil 球芽孢杆菌 Bgl Ⅱ ACATCT Escherichia coli RY13 大肠杆菌 EcoRⅠ GAATTC Haemophilus influenzae 流感嗜血菌 Hind Ⅲ AAGCTT HsuⅠ Providencia stuartii 164 普罗威登细菌 PstⅠ CTGCAG SalpⅠ Streptomyces albus Subspecies pathocidicus 白色链球菌 SalⅠ GTCGAC AvaⅠ XhoⅠ * T４ DNA连接酶用于互补粘性末端和平端DNA分子之间的连接。 DNA连接酶可以 催化带有粘性末端或平头末端的双链DNA中一条链的3 －OH与另一条链的5 －PO3H2形成磷酸二酯键而相连，从而构成一条完整的DNA长链。 DNA连接酶的用途 （1） 两个双链DNA片段连接起来 （2） 修补带有缺口的双链DNA分子 * * 大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ 具有5→3的聚合酶活性， 5→3外切酶活性, 3→5的外切酶活性。 * * * * Klenow片段（DNA pol.大片断） * 逆转录酶或者反转录酶（reverse transcriptase）是以mRNA为模板合成互补DNA即cDNA，用于组建cDNA基因文库。 * 第六章 同工酶 Isoenzymes * 同工酶（isoenzymes）是指同一种属中，一些催化功能相同，活性中心相同（或相似），但化学组成（即组成酶蛋白的氨基酸种类、数量、比例和排列顺序）不同、理化性质和免疫学性质不同、组织分布或细胞内定位不同的一组酶。 * 一、同工酶的分类 1976年，国际生化学会（IUB）生化命名委员会建议将酶的多分子形 式分为六类： 酶的多分子形式 举 例 1。遗传上相互独立的蛋白质 线粒体与胞液中的苹果酸脱氢酶 乳酸脱氢酶的纯聚体（LDH1，LDH5） 2。两条或多条不同多肽链以非共价 乳酸脱氢酶的杂交体（LDH2，LDH3，LDH4） 键聚合而成的杂交体 3。遗传变异的蛋白质（等位基因酶） 人葡糖6-磷酸脱氢酶 4。结合或衍生的蛋白质 1）与其他化学基团结合的 磷酸化酶、糖原合酶的磷酸化和脱磷酸化 2）由单一多肽链衍生的酶 酶原衍生的酶 5。单一亚基的多聚体 分子量为1×106和2.5 ×105的谷氨酸脱氢酶 6。不同的构象形式 酶的别位效应引起的不同构象形式 * 表中前三种为真正意义上的同工酶，也称原级同工酶。所以，同工酶 也可定义为同一种属中由不同基因位点或同一位点的复等位基因编码的多 肽链组成的单体、纯聚体或杂交体，其理化和生物学性质不同而能催化相 同反应的酶。 始祖LDH A 所有脊椎动物 A’ 鲑鱼 B’鲑鱼 B 所有脊椎动物 C 鸟类及哺乳动物睾丸 E 骨性鱼 * (一)原级同工酶 原级同工酶（primary isoenzymes）是指酶蛋白或其亚基的编码基 因不同而产生的同工酶，又称基因性同工酶（genetic isoenzymes）。 1．多基因位点同工酶（multiple genetic locus isoenzyme）特点 1）多基因位点同工酶是酶蛋白或其亚基由染色体上不同位点的基因 所编码。这些基因位于不同的染色体或同一染色体的不