第4章细胞全能性与器官发.pptVIP

第4章 细胞的全能性与器官发生 1. 植物细胞全能性、脱分化和再分化 1.1 植物细胞全能性（totipotency） 植物细胞全能性是指一个生活的植物细胞，只要有完整的膜系统和细胞核，它就会有一整套发育成一个完整植株的全部遗传信息，在适当的条件下，这些信息可以表达，再生成一个完整植株。 细胞的再生潜力与其分化程度呈负相关，就是说细胞分化程度越高其再生能力越低。越老的细胞，其基因的表达就越受到严格的制约，或者说丧失功能或不表现功能的基因越多，所以应尽量选取幼嫩的植物组织作为培养的实验材料。 1.2 脱分化(dedifferentiation) 由失去分裂能力的细胞回复到分生性状态并进行分裂， 形成一种高度液泡化的呈无定形态的薄壁细胞即愈伤组织的现象（或过程）称为“脱分化” （图3－1）。 一个细胞向分生状态回复过程所能进行的程度，取决于它在原来所处的自然部位上已经达到的细胞和生理状态（图3－2，见教材p43）。 1.3 再分化(redifferentiation) 由无分化的愈伤组织的细胞再转变成为具有一定结构，执行一定生理功能的细胞团和组织，进而构成一个完整的植物体或植物器官的现象（或过程），叫做“再分化” （图3－3）。 1.3.1 细胞水平的再分化 再分化中首先可见的是细胞壁变厚、假导管细胞的形成及酶水平的变化和明显的机能分化，从而形成各种类型的细胞。 1.3.2 组织水平的再分化 当愈伤组织在高水平生长素条件下，最常见的是维管组织的分化。松散的愈伤组织内含有大量拟分生组织或瘤状结构。致密的愈伤组织内组织分化很少，大多由高度液泡化的细胞组成。 1.3.3 器官水平的再分化 器官水平的再分化又称为器官发生。 根据起源不同，器官发生可分为器官型和器官发生型。前者直接由外植体的细胞形成器官原基，继而发育成器官；后者由外植体先形成愈伤组织，再由愈伤组织产生不同的器官原基。 1.3.4 植株再生 离体培养中再分化的主要途径是器官发生途径(organogenesis)和胚胎发生途径(embryogenesis) ，原球茎发生、绿色球状体（green globular body, GGB）发生、球状茎原基发生、外植体已存在的器官原基萌发等再生途径由于与器官发生有较密切的关系，将之归入广义的器官发生。 器官发生包括四种方式：①先形成芽，后在芽基部长根；②先形成根，再从根基部形成芽；③在愈伤组织不同部位分别形成芽和根，然后根、芽的维管束接通形成完整植株；④仅形成芽或根（如茶树的花粉愈伤组织诱导器官分化时，往往只形成根，而芽的发生则十分困难）。 其中① ② ③种方式可使植株重建。 2. 愈伤组织培养 2.1 愈伤组织形成的条件 愈伤组织诱导的成败关键主要不是外植体的来源和种类，而是培养条件，其中激素的种类和浓度最为重要（什么激素?）。 外植体的类型（如木本植物中的幼态或成年态）和外植体原来在植株上所处的位置（它反映了内源激素的水平）对愈伤组织诱导的影响也不能忽视。 2.2愈伤组织形成的过程 2.2.1诱导期 诱导期又称启动期，是愈伤组织形成的起点和外植体细胞进行分裂准备的时期。在这一时期，外植体上已分化的活细胞在外源激素和其他刺激因素的作用下，外植体细胞大小虽然没有多大变化，但其内部却发生了生理生化变化，细胞内合成代谢活跃，RNA含量迅速增加，细胞核体积明显增大（图3－4）。 2.2.2 分裂期 经过诱导期之后，外植体外层细胞开始迅速分裂，但中间部分的细胞不分裂，形成了一个静止的芯（图3－5）。 在这一时期由于细胞分裂的速度大大超过了细胞伸展的速率，细胞体积迅速变小，逐渐回复到分生状态，细胞进行脱分化。当细胞体积最小，细胞核和核仁最大，细胞内无大液泡，RNA含量最高时，标志着细胞分裂进入了高峰期（图3－4）。 2.2.3 形成期 形成期是指外植体细胞经过诱导期和分裂期后形成了无序结构的愈伤组织的时期（图3－6）。进入形成期后，细胞的平均大小相对稳定，不再减少，细胞分裂由原来局限在组织外缘的平周分裂转为组织内部较深层局部细胞的分裂，结果形成瘤状或片状的拟分生组织称做分生组织结节（p46）。 2.2.4 分化期 脱分化细胞不断进行分裂，形成愈伤组织。如果在原培养基上培养，细胞将不可避免地发生分化，产生新的结构，如及时转移到新鲜培养基上，愈伤组织可无限制地进行细胞分裂，维持其不分化的状态。 2.2.4 分化期 停止分裂的细胞发生生理代谢变化而形成由不同形态和功能的细胞组成的愈伤组织。在细胞分裂末期，细胞内开始发生一系列形态和生理变化，导致细胞在形态和生理功能上的分化，出现形态和功能各异的细胞。 以上几个时期并不是严格区分的，特别是分裂期和分化期往往可以出现在同一组织块上。 2.3 愈伤组织增殖的方式 为了研究愈伤组织在培养期间的形态变