植物的组织培养浙科版选修1.pptVIP

蛭石是一种天然、无毒的矿物质，在高温作用下。会膨胀的矿物。它是一种比较少见的矿物，属于硅酸盐。其晶体结构为单斜晶系，从外形上它看上去像云母。蛭石是一定的花岗岩水合时产生的。它一般与石棉同时产生。由于蛭石有离子交换的能力，它对土壤的营养有极大的作用。2000年世界的蛭石总产量超过50万吨。最主要的出产国是中国、南非、澳大利亚、津巴布韦和美国 3、材料的切取和接种 将装有培养基的锥形瓶整齐地排列在酒精灯左侧。将消过毒的菊花茎段在无菌培养皿中切成小段（长约0.5-1cm）。左手持锥形瓶。右手拉开捆扎锥形瓶的绳子，并将封口膜攥在右手手心，以避免封口膜接触瓶口的一面被污染。左手持瓶，使瓶口旋转通过火焰，右手用镊子夹取菊花茎段，放入培养基中。插入时应注意不要倒插。每瓶接种6－8块外植体。接种后，将封口膜重新扎好 （二）外植体（离体组织）消毒 　　注意：对培养材料进行表面灭菌时，一方面要考虑药剂的消毒效果；另一方面还要考虑植物材料的耐受能力。不同药剂、不同植物材料，甚至不同器官要区别对待。 1、70﹪酒精中浸泡10min，无菌水冲洗 2、5%次氯酸钠溶液中浸泡，无菌水冲洗 3、用另一5%次氯酸钠溶液浸泡5min，无菌水冲洗 4、超净台中用无菌水多次冲洗 （三）切段后接种 1、先用肥皂洗手，穿上工作服，戴上口罩和工作帽。 2、放入培养瓶和灭菌后的接种用具(镊子、解剖刀、接种针)，把镊子、解剖刀、接种针插入内盛70%酒精的广口瓶中。 3、在酒精灯火焰旁，打开三角瓶，把花茎用无菌解剖刀切成几段，每段至少有一张叶片 4、切段插入培养基，诱导愈伤组织，盖上封口膜。 5、愈伤组织插入生芽培养基，盖上封口膜。 6、用记号笔在瓶壁上写明培养材料、培养基代号、 接种日期。 注意事项 全部接种操作都是在无菌条件下进行的，所以要特别认真仔细，以防杂菌污染。 （四）培养 　接种后的锥形瓶最好放在无菌箱中培养。培养期间应定期消毒，温度控制在１８～２5℃，并且每日照光１4.5小时 。观察记录生长情况，并照相存档。 2-3周后将生长健壮的丛状苗在无菌条件下一个个转入生根培养基中，在上述条件下继续培养 (三)步骤 1.取外植体 超净台上将无菌幼苗切段,每段至少1张叶片 2.生芽培养 生芽培养基中,放入1-3段切段(茎部插入培养基,盖上封口膜.日光灯下保持18~25℃的温度培养,每天光照不少于14.5h 3.生根培养 2~3周后,将丛状苗在无菌条件下转入生根培养基中,在上述条件下继续培养. 4.适应锻炼 将苗转移至草炭土或蛭石中,用玻璃罩或塑料布保持80％以上的湿度,2~3天后打开减低湿度进行锻炼,直到将罩全部打开处于自然湿度下为止 4、接种注意事项 ①每接种一块外植体前，镊子需放入体积分数为75％的酒精溶液中消毒一次，然后在酒精灯火焰上烧一遍，冷却后再接种 ②外植体在培养基中要分布均匀，放置外植体数量根据锥形瓶的大小确定，一般胡萝卜3－4块，菊的茎或叶6－8块，也不要太少，以充分利用培养基中的营养成分和光照条件 ③插入时应注意方向，不要倒插。茎段、茎尖基部插入培养基利于吸收水分和养分 思考：你打算做几组重复？你打算设置对照实验吗？ 答：每种材料或配方至少要做一组以上的重复。设置对照实验可以取用一个经过灭菌的装有培养基的锥形瓶，与接种操作后的锥形瓶一同培养，用以说明培养基制作合格，没有被杂菌污染。 （四）培养 1、愈伤组织的培养 从接种外植体到出现愈伤组织需经过2周时间。2周之内可以看到外植体上逐渐长出乳白色或黄白色的瘤状愈伤组织。首次培养愈伤组织时，恒温箱的门应该关闭不必见光，因为在无光条件下愈伤组织长的更快。2周后，培养基成分接近耗尽，必须更换培养基，进行继代培养 继代培养所用的培养基与培养愈伤组织的相同，在严格的无菌条件下，将愈伤组织连同原来的外植体一起移到新培养基上。愈伤组织的继代培养一代为20d。如果延长时间，培养基中营养物质减少，外植体会分泌有毒物质，造成自身中毒。如果愈伤组织长到直径为1－1.5cm时，就可以进行试管苗培养，否则还需进行第二代继代培养 2、愈伤组织的继代培养 在愈伤组织继代培养期间，将恒温箱的门打开，让愈伤组织见光，愈伤组织见光后颜色可以转为绿色 3、试管苗的培养 当愈伤组织长到一定大小后，可以更换培养基，进行试管苗的见光培养 （五）移栽 移栽生根的菊花试管苗之前，应先打开培养瓶的封口膜，让试管苗在培养间生长几日 1、打开封口膜 2、清洗转移 用流水清洗根部的培养基，将幼苗移植到消过毒的蛭石或珍珠岩等环境下生活一段时间 （六）栽培 3、移栽 珍珠岩：固体基质型，含水量高、蓄水性强、透性好，适合栽培 幼苗长壮后，移栽到土壤中 幼苗移栽后，每天观察并记录幼苗的生长情况，