核磁共振波谱学方法在分子生物学中的应用.pptVIP

核磁共振(Nuclear Magnetic Resonance,NMR)波谱学方法在分子生物学中的应用 中国科学院生物物理研究所 王金凤 核磁共振技术发展史概述 1946年 E. M. Purcell和 F. Bloch发现核磁共振(NMR)现象 1965年前后 脉冲傅里叶变换NMR技术兴起 1971年 J. Jeener提出二维NMR 方法 80年代中 K. Wuthrich发展了运用同核二维核磁共振方法 进行蛋白质NMR谱图的序列识别方法 80年代末 遗传工程技术迅速发展，13C 和15N同位素标记 样品大量制备，A. Bax等人提出异核二维核磁共 振方法 90年代初 三维和四维异核核磁共振方法迅速发展，750 MHz (1993年) 和800 MHz (1995年)高场核磁共 振波谱仪问世 现在 900MHz核磁共振波谱仪已大量使用，并已可确 定分子量大于3.6 KDa的蛋白质溶液三维结构 一、 NMR简介 核磁共振方法简介 核磁共振是在二十世纪四十年代被发现的一种物理现象。在六十年的科学技术发展历程内，核磁共振方法在生物学、化学、物理学、药学、医学以及化学工业、食品工业、医药工业等方面显示了极大的生命力，成为研究分析各种物质及其性能的重要边缘学科。 　 按照核磁共振所研究的样品体系，我们可以将核磁共振技术分为溶液高分辨核磁共振、固体核磁共振及核磁共振成像： 溶液高分辨核磁共振: 以溶液样品为研究对象，主要用于研究生物分子、药物分子和化学分子体系中的相关问题。 固体核磁共振: 以固体样品为研究对象，在材料研究以及高分子聚合物的分析中是不可缺少的研究手段。 核磁共振成像技术: 可用以获得人和动物体中各种器官以及骨骼的断面图像，现今已发展成为医学上重要的诊断工具。 三类核磁共振基于同一物理原理，但是实验技术各不相同，对实验样品制备也有各不相同的要求。 在溶液高分辨核磁共振研究中，八十年代以来，由于遗传工程和基因工程技术的迅速发展，使得蛋白质分子得以在体外大量表达，解决了蛋白质大分子样品的制备问题，促使溶液高分辨核磁共振实验方法朝多维核磁共振方向发展。因而，目前已可用来确定分子量大到4万的蛋白质分子的溶液三维空间结构。为我们在接近生理条件下，在溶液三维结构的基础上研究蛋白质结构与功能的关系提供了重要的研究手段。 NMR方法的研究特点 在运用核磁共振方法分析物质时，物质分子中的原子核尤如一个精细的探针，允许核磁共振方法在分子、原子水平上探测物质，使我们得以深入了解物质的微观特性变化。 NMR是在分子、原子水平上检测物质特性。 原子核作为NMR的一个精细的探针探测物质的微观特性变化。 NMR研究不损伤蛋白质样品。 NMR可以检测包括化学反应，构象变化等动力学过程。 核磁共振技术的优缺点 天然状态下对样品进行探测 提供原子分辨率上的结构及动力学信息 灵敏度低,样品需要量大 样品制备成本高 可研究分子的分子量有限制 仪器昂贵 维护费用高 核磁共振实验的灵敏度 核磁共振波谱仪简介 现代的核磁共振波谱仪是由超导磁体，包含由射频发生、功率放大、脉冲形成及控制、信号检测等各种功能电子器件的主机，以及用于设置和控制实验的计算机系统所组成。当今世界科学技术的发展也促进了核磁共振波谱仪的发展，不仅是谱仪本身已近乎于全数字化，而且已先后研制成静磁场强度更高（或共振频率更高）的超导磁体。已可提供使用的不仅有600MHz高场超导磁体，更有750 MHz和800 MHz超导磁体，900 MHz超导磁体也已问世。核磁共振谱仪技术及实验方法的迅速发展大大扩展了核磁共振技术方法的应用范围。 Magnet NMR实验样品 溶液样品（500 ?l，浓度0.5-2.0 mM) 要求：高纯度，稳定性好，不聚合，溶解度高 固体粉末样品 液晶状态样品 样品配制： 取用适当的样品量(10 mg) 选择合适的D-solvent 取用合适的NMR sample tube (5 mm) 配制适当的量: ? 0.5 mL, 3 cm NMR实验步骤 二、NMR基本原理  原子核自旋运动：原子核的自身旋转运动。 用“自旋角动量”描述核自旋运动； 进行自旋运动的原子核都具有一定的自旋角动量； 核自旋角动量的大