肌苷和鸟苷生产菌中嘌呤核苷合成途径三段基因序列的分析.pdfVIP

卷 期 ! # 微 生 物 学 报 %’ (! - (# 年 月 #$$ ! !#$ %’()(*(+$ ,-$ )*+,’ #$$ !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! 肌苷和鸟苷生产菌中嘌呤核苷合成途径三段基因 序列的分析 钱江潮 蔡显鹏 储 炬 庄英萍 张嗣良 （华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室 上海#$$#@ ） 姚泉洪 彭日荷 （上海市农业科学院生物中心 上海#$..$; ） 摘 要：为了研究肌苷和鸟苷生产菌中与产苷有关的嘌呤核苷合成途径的遗传背景，选择了 ! # 操纵子的启动子序列、编码/)FG 合成酶的! #$ 基因和编码0FG 合成酶的%$ 基因，设 计合适的引物，分别从野生菌、一株肌苷低产菌和肌苷鸟苷高产菌中扩增出相应片段，经克隆 和测序后，对它们进行比较和分析。分析结果表明两株生产菌的 基因发生了 个碱基 ! #$ . 缺失，导致阅读框发生移码突变；而鸟苷高产菌在! # 操纵子的启动子部分和操纵子抑制蛋 白结合区域发生了近.$ H 的突变，可能影响整个操纵子的表达调控。 关键词：肌苷，鸟苷，生物合成，基因序列分析 中图分类号： 文献标识码： 文章编号： （ ） I? ) $$$.3;#$? #$$ $#3$#$$3$; 肌苷和鸟苷是两种多用途的嘌呤核苷，它们分别广泛应用于合成食品增鲜剂JFG 和 0FG 。此外，肌苷还可用于心脏病、肝病、白血球减少症、血小板减少症、视神经萎缩和中 心性视网膜炎等疾病的治疗，能预防及解除由血防药物引起的对心脏或肝脏的副作用，鸟 苷则还可作为三氮唑核苷、无环鸟苷等许多抗病毒药物的合成原料。因此，有关它们的生 ［，］ 产从六十年代以来就开展了大量的研究工作. # 。 在生产菌的选育和改造方面，日本味之素公司和武田制药厂都利用磷酸单酯酶活力 很强的枯草芽孢杆菌或短小芽孢杆菌作为诱变出发菌株，采用物理或化学诱变方法，选育 出产苷水平较高的生产菌株。六十年代末至八十年代初，针对细菌体内核苷酸合成途径 和调节机理开展了大量研究，并完成了嘌呤核苷生物合成途径操纵子的基因克隆和全序 ［］ ［，］ 列测定 ! K ，研究的重点随之转移到利用基因工程的方法构建重组菌 。在发酵工艺研究 方面，通过发酵过程中多参数的相关分析，实时分析和调控发酵过程的代谢流迁移，在鸟 ［］ 苷发酵中取得了突破性进展，将产苷水平稳定在$8L M ; 。为了进一步提高生产水平，并 在基因水平了解生产菌株的特性，对生产菌中嘌呤核苷合成途径的遗传背景进行研究，为 基因改造提供理性指导。 为此，我们采用野生型和一株肌苷低产菌作为对照，选择*N+ 操纵子（编码嘌呤生物 合成途径中的 个蛋白）的启动子序列， 基因（编码 合成酶）， 基因（编码 .#