第三章组织培养及基因表现–动物系统TissueCultureandGene.PDFVIP

第三章 組織培養及基因表現 – 動物系統 Tissue Culture and Gene Expression – Animal System 羅竹芳1 周姽嫄2 1 2 台灣大學動物學系 教授 清華大學生命科學系 教授 一、前言 體外培養動物細胞、組織及器官（動物組織培養）技術的開發，不但提供科學家探索生 命奧秘的模式系統，也可以輔助新藥開發，及協助解決一些人類疾病研究與治療的問題。近 年來基因轉殖及表現於動物細胞或組織中技術的開發，更大幅提昇體外培養組織及細胞於生 物醫學之應用層次。組織培養及基因表現技術已於前版『進階版生物技術』一書中詳細介紹 (1,2) ，因此在這篇文章中，作者將延續前版基礎，進一步介紹哺乳動物初代細胞培養及用途， 並介紹各種以病毒為媒介的基因表現載體及一些針對特殊目的所進行的載體設計。病毒載體 可協助將外源基因(exogenous gene)送入一般較不易以化學及物理方法進行基因轉染 (transfection) (3) 的動物細胞，其中部分載體也同時可應用於基因治療 。 二、動物組織培養 培養的動物細胞可約略分為有培養期限之細胞及具有持續繼代培養能力之轉型細胞株 (transformed cell line) 兩大類型。前者是直接取自於動物組織經蛋白酵素分解成單細胞或細 胞團後培養之初代細胞(primary culture) ；或初代細胞經繼代培養後長成為的“正常細胞” (normal cell) ；此二者共通點是具有固定之存活或生長期限、正常之染色體組成、和較多之分 化特徵。轉型細胞株則指已經轉型(transformed)的細胞，因此獲得不朽(immortalized)的生長 能力、或已更進一步獲得可於低生長因子環境 、或不需貼附即可生長之能力。雖然偶爾部分 哺乳動物可持續繼代培養細胞株的染色體組成可為二倍體，但一般而言在轉型的過程中細胞 之染色體已經產生變化。讀者可參考 American Type Culture Collection 網站 () 瞭解該機構代保存的各種建立細胞株的來源及其特性。 雖然建立及培養初代細胞較不容易，但初代細胞比轉型細胞株具有較多之分化特徵，有 些初代細胞也具有幹細胞之分化潛能，因此在藥物研發上具備一般轉型細胞株不易取代之用 途。以神經細胞培養為例，雖有一些神經母細胞株(neuroblastoma)可於特定環境下誘導表現 出一些分化的神經細胞特性，但這些特性往往離理想的成熟神經元特徵仍有一些距離，因此 進行藥理學測試、神經毒理及保護測試仍須採用培養的初代細胞或腦組織薄切片為材料。同 19 樣地，體外培養肝切片或源自於肝臟的不同細胞種類的初代細胞也是體外藥物測試的選擇之 一。 過去培養初代神經細胞如同培養一般細胞般使用基本鹽類培養基並添加血清，有時尚需 (feeder cells) (glia) 要加入飼養細胞 。由於血清中的生長因子也會促使神經膠質細胞 生長，因 此往往需於培養基中添加藥物毒殺具細胞分裂能力的神經膠原細胞。然而毒殺效果通常不能 達到百分之百，因此經過一、二星期培養後，神經膠原細胞所佔比例會逐漸增高，甚至高過 神經細胞所佔比例。在此混有二種細胞之初代培養細胞中進行藥物測試，較難判定藥物作用 效果是來自於該藥物對神經細胞、或膠原細胞 、或兩種細胞共同作用的結果。此外，血清中 往往已具有各種不同生物活性因子，因此添加測試藥劑所得結果往往是與血清中成份共同作 用後所導致，不易區分待測藥物之作用機制；藥物測試結果也可能因血清成份不易完全掌控 而不一致，造成不必要之困擾。近年來，科學家已逐漸開發出無血清神經細胞培養條件， Brewer 等人(4)更進一步將無血清培養基中添加物逐一測試，訂出最有利於神經細胞存活之培 養條件，現在 Brewer 等人發展出的培養